Hifair™ Bộ dụng cụ thăm dò RT-qPCR một bước V Multiplex (UDG Thêm vào đó) là bộ PCR định lượng đa thành phần dựa trên RNA làm khuôn mẫu. Trong quá trình thí nghiệm, phiên mã ngược và PCR định lượng được thực hiện trong cùng một ống, giúp đơn giản hóa thao tác thí nghiệm và giảm nguy cơ nhiễm bẩn.

Trong bộ dụng cụ này, sợi cDNA đầu tiên được tổng hợp hiệu quả bằng Hifair chịu nhiệt^TM V Reverse Transcriptase và khuếch đại định lượng bởi UNICON^TM HotStart Taq DNA Polymerase. Bộ dụng cụ chủ yếu chứa đệm MP được tối ưu hóa, hỗn hợp enzyme, v.v. Dung dịch đệm đã chứa Mg²⁺ và dNTP. Ngoài ra, các yếu tố có thể ức chế hiệu quả sự khuếch đại PCR không đặc hiệu và cải thiện hiệu quả khuếch đại của nhiều phản ứng qPCR được thêm vào, có thể đảm bảo hiệu quả khuếch đại và thực hiện tới nhiều phản ứng khuếch đại. Hệ thống dUTP/UDG được thêm vào để ngăn ngừa hiệu quả nguy cơ ô nhiễm khí dung.

Đặc trưng

Độ nhạy cao：Hệ thống đệm được tối ưu hóa cẩn thận giúp cải thiện độ nhạy phát hiện của các mẫu có nồng độ thấp lên đến 250 bản sao/mL；

Độ ổn định cao: Sản phẩm đã vượt qua thử nghiệm độ ổn định theo thời gian thực trong 18 tháng.

Hệ thống chống ô nhiễm dUP/UDG：Hệ thống chống ô nhiễm dUTP/UDG được đưa vào sử dụng để phân hủy ô nhiễm khí dung của sản phẩm một cách hiệu quả, giảm thiểu kết quả dương tính giả và đảm bảo kết quả xác thực；

Hỗ trợ chương trình nhanh: tương thích với chương trình nhanh, 40 phút có thể tạo ra kết quả;

Thành phần

Ghi chú: 1) 2×Hifair^TM Bộ đệm V MP là chữ viết tắt của Hifair^TM Bộ đệm thăm dò RT-qPCR một bước V Multiplex, bao gồm dNTPs, dUTP, Mg2+, chất ổn định, chất tăng cường và nhiều chất khác.

2) Hifair^TM Hỗn hợp V Enzyme chủ yếu chứa chịu nhiệt Hifair^TM Phiên mã ngược V, UNICONTM HotStart Taq DNA polymeras và UDGase.

Kho

TAnh ta sản phẩm nên là được lưu trữ Tại -25°C~-15°C vì 18 tháng.

Hướng dẫn

Thành phần phản ứng

Ghi chú：Đảm bảo trộn đều trước khi sử dụng, tránh tạo ra nhiều bọt khí do rung động mạnh.

a) Mồi/Thăm dò sự tập trung: Mồi trộn bao gồm mồi đa năng, tùy thuộc vào tình huống, nồng độ mồi tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 0,1 đến 1,0 μM.Hỗn hợp đầu dò bao gồm sự khác biệt về nhãn đầu dò đa kênh, nhóm huỳnh quang, tùy thuộc vào tình huống, nồng độ đầu dò tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 0,05 đến 0.5 μM.

c) Pha loãng mẫu: qPCR có độ nhạy cao và nên pha loãng mẫu. Giá trị Ct kiểm soát phù hợp trong khoảng từ 20 đến 35.

ngày) Chuẩn bị hệ thống: tháo đầu lọc. Tránh ô nhiễm chéo và ô nhiễm khí dung.

Giao thức đạp xe được tối ưu hóa

Ghi chú：a) Rphiên âm ngược: Nhiệt độ có thể chọn 42°C hoặc 50°C trong 10-15 phút.

b) Phản ứng khuếch đại: Nhiệt độ được điều chỉnh theo giá trị Tm của các đoạn mồi được thiết kế.

c) Thu tín hiệu huỳnh quang: Vui lòng thiết lập quy trình thử nghiệm theo yêu cầu của hướng dẫn sử dụng thiết bị.

3. Ứng dụng thiết bị

Thiết bị với Rox：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Nhanh, StepOne™, StepOne Plus™

Thiết bị có Low Rox：ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 và 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

Thiết bị không có Rox：

Sinh học Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 giây; Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000

Khoa học ứng dụng Roche LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96

Nhiệt độ Máy lắc PikoReal Cycler khoa học; Cepheid SmartCycler®; Ánh sáng Sinh thái qPCR

Ghi chú

Vui lòng mặc đồ bảo hộ cá nhân cần thiết, chẳng hạn như áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn！

Vui lòng sử dụng vật tư tiêu hao RNasefree vì thí nghiệm.

Kiểm tra độ nhạy

13650 được bảo quản ở -20°C trong 18 tháng (nhóm thử nghiệm) và những mẫu trong thời hạn sử dụng (nhóm đối chứng) đã được thử nghiệm đồng thời về pha loãng gradient (500 bản sao/ml, 250 bản sao/ml) của pseudovirus SARS-CoV-2, nhắm vào gen ORF và gen N. Tám giếng sao chép đã được thử nghiệm cho mỗi nồng độ, với tỷ lệ phát hiện là 100%. Hơn nữa, không có sự khác biệt đáng kể nào về hình dạng đỉnh đường cong khuếch đại và giá trị Ct.

Kiểm tra độ ổn định thời gian thực

13650 được bảo quản ở nhiệt độ -20°C trong 18 tháng và những mẫu trong thời hạn sử dụng của chúng. Cả hai nhóm đều được thử nghiệm đồng thời đối với gen ORF của pseudovirus SARS-CoV-2 và gen N ở nồng độ 1000 bản sao/ml với 20 giếng sao chép. Tỷ lệ phát hiện đối với cả hai là 100% và không có sự khác biệt đáng kể nào về hình dạng của đường cong khuếch đại hoặc giá trị Ct.

Hình 1. Rbiên tập: 13650 trong thời hạn sử dụng của chúng；màu xanh da trời：13650 được bảo quản ở nhiệt độ -20°C trong 18 tháng。

Hiệu suất ổn định sau nhiều chu kỳ đóng băng-tan băng

Khi tiến hành thử nghiệm thuốc thử 13650 qua 30 và 50 chu kỳ đông-tan băng bằng đá khô, cùng với các thuốc thử được bảo quản bình thường ở nhiệt độ -20°C và đồng thời thử nghiệm gen ORF của vi-rút giả SARS-CoV-2, kết quả cho thấy hiệu suất của thuốc thử 13650 không bị ảnh hưởng sau 50 chu kỳ đông-tan băng.

Hình 2. Đỏ: 13650 được bảo quản bình thường ở nhiệt độ -20°C; Màu tím：13650 đến 30 chu kỳ đông lạnh-tan băng；Màu xanh lá：13650 đến 50 chu kỳ đóng băng-tan băng.

Tương thích với các giao thức chuẩn và nhanh

Sử dụng 13650ES, gen ORF và gen N của pseudovirus SARS-CoV-2 đã được phát hiện trong cùng một hệ thống phản ứng với cả giao thức chuẩn và nhanh. Kết quả cho thấy trong hệ thống 4-plex, không có sự khác biệt về hình dạng đỉnh đường cong khuếch đại và giá trị Ct giữa hai giao thức.

Tài liệu:

Hướng dẫn sử dụng