RNase HII là một enzyme nội bộ ribonuclease thu được từ Pyrococcus abyssi và được thể hiện tái tổ hợp trong Vi khuẩn E. Coli. Nó nhận ra chuỗi kép DNA-rN-DNA/DNA, cắt tại vị trí mà ribonucleotide được kết hợp vào DNA. Tuy nhiên, hoạt động của nó trên RNA sợi đơn rất thấp và nó không cho thấy hoạt động cắt trên dsDNA hoặc ssDNA. RNase HII cắt tại vị trí của một gốc ribonucleotide đơn lẻ từ đầu 5', tạo ra nhóm phosphate 5' và đầu hydroxyl 3' sau khi cắt. Enzym RNase HII này có hoạt động tối ưu ở 70~75°C, hoạt động trong khoảng từ 50°C đến 75°C, nhưng có hoạt động rất thấp ở nhiệt độ phòng. Sản phẩm có độ bền nhiệt cao, hầu như không mất hoạt động sau khi ủ ở 95°C trong 45 phút và tương thích với nhiều hệ thống phản ứng PCR khác nhau.

Thông số kỹ thuật

Thành phần

Kho

Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ -25~-15℃ trong 2 năm.

Ứng dụng sản phẩm

1. Phát hiện bằng LAMP với đầu dò có độ nhạy cao.
2. PCR phụ thuộc RNase HII (rhPCR).
3. Loại bỏ các ribonucleotide không khớp được hình thành trong phản ứng chuỗi polymerase.
4. Sự phân hủy phần RNA của các đoạn Okazaki.

Ghi chú

1. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu.
2. Vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để đảm bảo an toàn.

Các con số

1. E. coli dư lượng DNA bộ gen < 0,5 bản sao/100 U

Phát hiện Vi khuẩn E. coli phần còn lại của DNA bộ gen trong các lô RNase HII khác nhau cho thấy phần còn lại của DNA bộ gen vật chủ YeasenRNase HII của 's thấp hơn nhiều so với 0,5 bản sao/100 U.

Hình 4. Phát hiện Vi khuẩn E. coli dư lượng DNA bộ gen

2. Kiểm tra khả năng chịu nhiệt 95°C

Sau khi đun nóng RNase HII ở 95°C trong 0 đến 45 phút, hoạt động của enzyme RNase HII đã được thử nghiệm. Kết quả cho thấy hầu như không có sự mất hoạt động của enzyme trong YeasenRNase HII vẫn hoạt động ngay cả sau 45 phút đun nóng.

Hình 5. Thử nghiệm khả năng chịu nhiệt 95°C

3. Không có Exonuclease, Enzym cắt, hoặc Dư lượng RNase (Liều 1 U)

Khi ủ 1 U các lô RNase HII khác nhau với các chất nền DNA/RNA tương ứng của chúng ở 37°C trong 4 giờ, kết quả điện di trên gel agarose cho thấy không có exonuclease, enzyme cắt hoặc dư lượng RNase trong RNase HII.

Hình 6. Phát hiện exonuclease, enzyme cắt và dư lượng RNase

Tài liệu:

Hướng dẫn sử dụng