Sự miêu tả
Tth DNA Polymerase là một DNA polymerase chịu nhiệt được phát hiện từ vi khuẩn ưa nhiệt Nhiệt kế HB8. Khi có Mg²⁺, enzyme này thể hiện hoạt động của DNA polymerase 5′-3′ và hoạt động của exonuclease 5′-3′, nhưng thiếu hoạt động của exonuclease 3′-5′, khiến nó có thể ứng dụng rộng rãi cho các phản ứng khuếch đại PCR. Khi có Mn²⁺, enzyme này thể hiện hoạt động phiên mã ngược mạnh ở nhiệt độ 55-70°C, khiến nó phù hợp cho các phản ứng RT-PCR một bước.
Đặc điểm kỹ thuật
Định nghĩa đơn vị: Một đơn vị hoạt động (U) được định nghĩa là lượng enzyme kết hợp 10 nmol tổng số nucleotide thành sản phẩm không tan trong axit trong 30 phút ở 74°C, sử dụng DNA tinh trùng cá hồi đã hoạt hóa làm khuôn mẫu/mồi.
Thành phần
| KHÔNG. | Tên | Kích cỡ | |
| 14607ES72 (250 U) | 14607ES80 (1250 Bạn) | ||
| 14607-A | Tth DNA Polymerase (5 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
| 14607-B | RT-PCR 5×T Bộ đệm | 1mL | 4×1,25 ml |
| 14607-C | PCR 10×T Bộ đệm (với Mg2+) | 500 μL | 2×1,25 ml |
| 14607-D | 50mM Mg(OAc)2 | 250 μL | 1,25 ml |
| 14607-E | Hỗn hợp dNTP (mỗi loại 10 mM) | 150 μL | 750 μL |
Vận chuyển và Lưu trữ
Vận chuyểnvới đá khô. Lưu trữ Tại -20°C, thời hạn sử dụng 2 năm.
Các biện pháp phòng ngừa
1) Nếu có một lượng nhỏ kết tủa xuất hiện trong dung dịch đệm khi rã đông, đây là hiện tượng bình thường. Vui lòng đảo ngược và trộn đều trước khi sử dụng.
2) Để đảm bảo an toàn và sức khỏe, hãy mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần trong quá trình thực hiện.
3) Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu!
Hướng dẫn
Quy trình phản ứng PCR được khuyến nghị:
1.Chuẩn bị hệ thống phản ứng
| Tên | Âm lượng (μL) |
| PCR 10×T Bộ đệm (với Mg2+) | 5 |
| Tth DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,5 |
| Hỗn hợp dNTP (mỗi loại 10 mM) | 1 |
| thượng nguồn Mồi 10μM | 2 |
| Hạ lưu Mồi 10μM | 2 |
| Mẫu DNA | 50 trang- 1μg |
| ĐD2Ồ | ĐẾN 50 |
[Lưu ý]: Lượng DNA Polymerase Tth, các đoạn mồi trước và sau, và hỗn hợp dNTP có thể được điều chỉnh theo nhu cầu thử nghiệm cụ thể.
2. Thiết lập chu kỳ
| Các bước | Nhiệt độ(ºC) | Thời gian | Chu kỳ |
| Tiền biến tính | 94 | 30 giây-5 phút | 1 |
| Sự biến tính | 94 | 30 giây |
35
|
| Ủ | 50-70 | 30 giây | |
| Sự mở rộng | 72 | 60 giây/kb | |
| Mở rộng cuối cùng | 72 | 10 phút | 1 |
[Lưu ý]: Điều kiện phản ứng có thể được điều chỉnh theo yêu cầu thực nghiệm cụ thể.
Quy trình phản ứng RT-PCR được khuyến nghị:
1. Chuẩn bị hệ thống phản ứng
| Tên | Âm lượng (μL) |
| RT-PCR 5×T Bộ đệm | 10 |
| Tth DNA Polymerase (5 U/μL) | 1,5 |
| 50mM Mg(OAc)2 | 2,5 |
| Hỗn hợp dNTP (mỗi loại 10 mM) | 1,5 |
| thượng nguồn Mồi 10μM | 2 |
| Hạ lưu Mồi 10μM | 2 |
| Bản mẫu ARN | 50 trang- 1μg |
| ddH2O | ĐẾN 50 |
[Lưu ý]: Lượng DNA Polymerase Tth, các đoạn mồi trước và sau, và hỗn hợp dNTP có thể được điều chỉnh theo nhu cầu thử nghiệm cụ thể.
2.Thiết lập chu kỳ
| Các bước | Nhiệt độ (ºC) | Thời gian | Chu kỳ |
| Phiên mã ngược | 55-70 | 30 phút | 1 |
| Trước đósự biến tính | 94 | 30 giây-5 phút | 1 |
| Sự biến tính | 94 | 30 giây |
35
|
| Ủ | 50-70 | 30 giây | |
| Sự mở rộng | 72 | 60 giây/kb | |
| Mở rộng cuối cùng | 72 | 10 phút | 1 |
[Lưu ý]: Điều kiện phản ứng có thể được điều chỉnh theo yêu cầu thực nghiệm cụ thể.
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.