Sự miêu tả
Hifair™ Super Reverse Transcriptase là một phiên mã ngược thế hệ tiếp theo, cái mà là eNđược chế biến từ M-MLV. Enzym này thiếu hoạt động RNase H và thể hiện tính ổn định nhiệt được cải thiện đáng kể, chịu được nhiệt độ phản ứng lên tới 70°C. Nó rất phù hợp cho quá trình phiên mã ngược hiệu quả của các khuôn mẫu RNA có cấu trúc thứ cấp phức tạp.
Ứng dụng
Sản phẩm này phù hợp cho các thí nghiệm tổng hợp RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq và cDNA. Nhiệt độ phản ứng phiên mã ngược có thể đạt tới 70°C.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị (U) hoạt động của enzyme được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để kết hợp 1 nmol dTTP vào vật liệu không tan trong axit trong vòng 10 phút ở 37°C, sử dụng Poly(A).Oligo(dT) làm mồi khuôn mẫu.
Thành phần
| Thành phần | Tên | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Siêu phiên mã ngược (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Điều kiện lưu trữ
Bảo quản ở nhiệt độ từ -25˚C đến -15˚C trong tối đa 18 tháng.
Hướng dẫn sử dụng
Quy trình tổng hợp cDNA sợi đầu tiên
1. Biến tính RNA (Bước tùy chọn)
1. Sự biến tính RNA giúp mở các cấu trúc thứ cấp, cải thiện đáng kể sản lượng cDNA sợi đầu tiên.
| Thành phần | Âm lượng |
| ddH2O không có RNase | đến 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) hoặc Mồi ngẫu nhiên (50 μM) hoặc Mồi đặc hiệu gen (2 μM) | 1 μL |
| Mẫu RNA | Tổng RNA: 10 pg - 5 μg hoặc mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Đun nóng ở nhiệt độ 65°C trong 5 phút, sau đó nhanh chóng làm lạnh bằng đá trong 2 phút.
· Ly tâm nhanh để thu thập chất lỏng phản ứng và thêm hỗn hợp phản ứng phiên mã ngược như minh họa bên dưới.
2. Thiết lập phản ứng phiên mã ngược (Hệ thống 20 μL)
| Thành phần | Âm lượng |
| Hỗn hợp phản ứng từ bước trước | 13 μL |
| Đệm phản ứng 5× | 4 μL |
| Hỗn hợp dNTP (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® Siêu Phiên Mã Ngược (200 U/μL) | 1 μL |
| Chất ức chế RNase (40 U/μL) | 1 μL |
3. Cài đặt chương trình phiên mã ngược
| Nhiệt độ | Thời gian |
| 25°C* | 5 phút |
| 50-70°C | 15-30 phút |
| 85°C** | 5 phút |
*Khi sử dụng mồi ngẫu nhiên, ủ ở 25°C trong 5 phút. Nếu sử dụng mồi Oligo(dT)18 hoặc mồi đặc hiệu gen, có thể bỏ qua bước này.
Đun nóng ở nhiệt độ 85°C trong 5 phút sẽ vô hiệu hóa enzyme phiên mã ngược và có thể điều chỉnh nếu cần.
Sản phẩm phiên mã ngược có thể được sử dụng ngay cho các phản ứng PCR hoặc qPCR tiếp theo, bảo quản ngắn hạn ở -20°C hoặc bảo quản dài hạn ở -80°C sau khi chia nhỏ để tránh các chu kỳ đông lạnh-rã đông.
Các biện pháp phòng ngừa
1. Duy trì môi trường phòng thí nghiệm sạch sẽ; đeo găng tay và khẩu trang sạch. Đảm bảo tất cả vật tư tiêu hao thí nghiệm không chứa RNase để tránh nhiễm bẩn.
2. Thực hiện mọi thao tác trên đá để ngăn ngừa sự phân hủy RNA.
3. Sử dụng các mẫu RNA chất lượng cao để đảm bảo quá trình phiên mã ngược hiệu quả.
4. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu.
5. Để đảm bảo an toàn và sức khỏe, hãy mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần khi xử lý sản phẩm.
Tài liệu:
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.
