Nuclease AapCas12b (còn được gọi là C2c1) là một endonuclease DNA được trung gian bởi tracrRNA:crRNA (hoặc sgRNA), có nguồn gốc từ vi khuẩn ưa nhiệt Vi khuẩn axit alicyclobacillus. Khi có trình tự PAM (TTN) tại DNA mạch kép mục tiêu (dsDNA), nó sẽ cắt cụ thể dsDNA mục tiêu, gây ra sự đứt gãy mạch kép và tạo ra các đầu dính. AapCas12b có thể cắt cụ thể các mục tiêu DNA mạch đơn độc lập với trình tự PAM. Cả mục tiêu DNA mạch kép và mạch đơn đều có thể kích hoạt hoạt động cắt xuyên của AapCas12b. Khi enzyme AapCas12b tạo thành phức hợp ba thành phần với sgRNA và DNA mục tiêu, nó sẽ được kích hoạt để thực hiện hoạt động cắt xuyên ssDNA không đặc hiệu, cắt bất kỳ trình tự ssDNA tùy ý nào trong hệ thống. Nhiệt độ phản ứng cắt tối ưu cho AapCas12b là 60^ôiC, giúp nó chịu nhiệt tốt hơn AacCas12b và phù hợp hơn khi sử dụng với LAMP để phát triển hệ thống khuếch đại đẳng nhiệt/phát hiện CRISPR-Cas.

Đặc trưng

Phạm vi nhiệt độ phản ứng rộng: Thể hiện hoạt động phân cắt trong phạm vi nhiệt độ 37~65^ôiC

Dư lượng nuclease thấp: Không có exonuclease, nickase hoặc RNase còn sót lại

Hoạt động phân cắt cis: Phân cắt DNA sợi đôi hiệu quả cao trong ống nghiệm

Hoạt động xuyên phân cắt: Hoạt động cắt xuyên gen cao, thích hợp để phát hiện axit nucleic

Ứng dụng

Chỉnh sửa gen CRISPR/Cas

Chẩn đoán và phát hiện dựa trên hệ thống CRISPR/Cas

Các ứng dụng phát hiện khác kết hợp với công nghệ khuếch đại axit nucleic đẳng nhiệt (RPA và LAMP), v.v.

Thông số kỹ thuật

Thành phần

Tàu thủyping và Lưu trữ

Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ -25 ~ -15^ôiC trong 2 năm.

Các con số

Nhân vật 1. Xác minh hoạt động cắt cis của Nuclease AapCas12b

Ghi chú: Trong một 20 μHệ thống phản ứng L chứa Target dsDNA với trình tự PAM, sgRNA, Cas12b và 1×đệm phản ứng, hỗn hợp được ủ ở 60^ôiC trong 30 phút và sau đó bất hoạt ở 85^ôiC trong 5 phút. Kết quả điện di trên gel agarose cho thấy cả ba lô Nuclease AapCas12b đều có khả năng cắt dsDNA hiệu quả, với hiệu suất cắt tương đương với nhãn hiệu T* nhập khẩu.

Nhân vật 2. Kết quả thử nghiệm hoạt động cắt xuyên Nuclease AapCas12b

Ghi chú: Trong một 20 μHệ thống phản ứng L chứa Target dsDNA với trình tự PAM, sgRNA, Cas12b, đầu dò huỳnh quang Report ssDNA và 1×đệm phản ứng, hỗn hợp được ủ ở 60^ôiC trong 1 giờ và tín hiệu huỳnh quang được thu thập sau mỗi 30 giây. Kết quả cho thấy khi có DNA mục tiêu, sgRNA và Cas12b cùng nhau, đầu dò huỳnh quang ssDNA Report có thể bị cắt, do đó giải phóng tín hiệu huỳnh quang.

Tài liệu:

Bảng dữ liệu an toàn

14808_MSDS_Phiên bản EN20241209.pdf

Hướng dẫn sử dụng

14808_Hướng dẫn sử dụng_Phiên bản EN20241209.pdf