Bộ dụng cụ được trang bị đệm ly giải mạnh mẽ, có thể nhanh chóng ly giải các mẫu (ví dụ như tế bào, đuôi chuột, tai chuột, ngón chân chuột, cơ, v.v.) để giải phóng DNA bộ gen và chất ly giải có thể được thêm trực tiếp vào hệ thống phản ứng PCR mà không cần tinh chế, rất thuận tiện cho việc vận hành. Ngoài ra, bộ dụng cụ này yêu cầu lượng mẫu đầu vào thấp, có thể sử dụng 5 mg mô chuột hoặc 1-5 mm đuôi chuột cho các thí nghiệm.

Thành phần

Kho

19697-A (Dung dịch ly giải) nên được bảo quản ở 2~8℃ cho 1 năm. Nếu sử dụng nhiều lần, vui lòng đông lạnh trong các gói riêng biệt để tránh lây nhiễm chéo. 19687-B (Dừng giải pháp) nên được lưu trữ tại -25~-16℃ cho 1 năm.

Hướng dẫn

Phát hành DNA bộ gen chuột

1. Cắt 5-10 mg mô động vật hoặc đuôi chuột dài 1-5 mm vào ống ly tâm 1,5 mL*.
2. Thêm 90 μL đệm ML vào ống ly tâm ở trên, lắc nhẹ để thấm hoàn toàn mẫu bằng chất phân hủy và ly tâm trong thời gian ngắn.
3. Ủ ở nhiệt độ 95°C trong 15 phút trong tủ ấm điều nhiệt**.
4. Thêm 10 μL đệm MT, lắc đều và kết thúc quá trình ly giải.
5. Bước tùy chọn: ly tâm ở tốc độ 12000 vòng/phút trong 2 phút.
6. Chuyển phần dịch trong sang ống ly tâm mới và bảo quản ở nhiệt độ 4°C hoặc -20°C hoặc lấy trực tiếp phần dịch trong để khuếch đại PCR tiếp theo.

* Nên cắt nhỏ mô càng nhiều càng tốt để phản ứng phân hủy diễn ra suôn sẻ hơn.

**Ủ ở 95°C trong 15 phút thường là đủ cho hầu hết các nhu cầu PCR. Nếu cần lượng DNA lớn hơn hoặc mẫu khó phân hủy, thời gian có thể kéo dài đến 30 phút. Khối mô không cần phải phân hủy hoàn toàn và phần còn lại có thể được loại bỏ trong bước ly tâm tiếp theo.

Phát hành DNA bộ gen tế bào

Sau khi nuôi cấy tế bào chuyển gen trong đĩa 48 giếng trong 3 ngày và đạt mật độ tế bào khoảng 70.000 tế bào/giếng, loại bỏ môi trường càng hoàn toàn càng tốt. Sau đó, thêm 90ul đệm ML trực tiếp vào mỗi giếng và hút từng giếng. Chuyển tất cả vào đĩa PCR 96 giếng. Sau khi xử lý bằng máy PCR ở 95 °C trong 5-15 phút và làm mát, thêm 10ul đệm MT và thổi đều và kỹ. Sử dụng enzyme có độ trung thực cao (Cat# 10164) hoặc enzyme Taq, thêm 0,5-2ul dịch ly giải tế bào vào mỗi 50ul hệ thống phản ứng PCR và thực hiện PCR.

Hình 1. PCR trực tiếp với dịch tế bào được xử lý bằng 19697.

Ghi chú

1. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu.
2. Vui lòng sử dụng kính bảo hộ, áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để đảm bảo an toàn.
3. Để tránh lây nhiễm chéo giữa các mẫu, cần nhúng mép dụng cụ lấy mẫu hoặc bộ phận tiếp xúc trực tiếp với mẫu vào dung dịch natri hypoclorit 2% sau mỗi lần lấy mẫu, rửa nhiều lần, sau đó dùng khăn giấy sạch lau khô phần chất lỏng còn lại trước khi sử dụng lại.Để thuận tiện cho việc thử nghiệm, có thể chuẩn bị và vệ sinh đồng bộ nhiều thiết bị lấy mẫu sau khi sử dụng để đảm bảo mỗi mẫu riêng lẻ đều được lấy mẫu bằng thiết bị lấy mẫu không bị nhiễm bẩn.
4. Nên sử dụng mô động vật mới lấy. Trong trường hợp mô đông lạnh lâu ngày, nên tránh đông lạnh và rã đông nhiều lần, nếu không sẽ dẫn đến sự phân hủy của khuôn mẫu và ảnh hưởng đến hiệu quả PCR.

Tài liệu:

Hướng dẫn sử dụng