Hạt Concanavalin A (ConA) là các vi cầu polyme siêu thuận từ đã được ghép nối cộng hóa trị với Concanavalin A (một loại lectin liên kết mannose/glucose thực vật được phân lập từ hạt của cây ngũ cốc) trên bề mặt của chúng. Những hạt này sở hữu một số đặc điểm đáng chú ý, bao gồm sự phân tán đơn và phản ứng từ mạnh. Khi Ca²⁺ và Mg²⁺ Khi có các ion hiện diện, hạt từ tính ConA có thể phân tách và tinh chế hiệu quả và nhanh chóng nhiều phân tử sinh học khác nhau như polysaccharides, glycoprotein và glycolipid bằng cách sử dụng ái lực giữa ConA globulin A và nhóm α-D-mannose và α-D-glucose đầu cuối.

Hạt từ ConA cung cấp một phương pháp thuận tiện để tách hoặc cố định tế bào, đảm bảo mất tế bào tối thiểu trong các bước rửa tiếp theo. Ngoài ra, chúng có thể được sử dụng để thu thập và cố định nhân. Hơn nữa, những hạt này có ích trong các kỹ thuật cải tiến như CUT & Run và CUT & Tag, đây là những phương pháp tiếp cận mang tính cách mạng được sử dụng trong các thí nghiệm ChIP-seq.

Tóm lại, hạt từ tính ConA là công cụ mạnh mẽ để tinh chế hiệu quả các phân tử sinh học, tách và cố định tế bào thuận tiện, thu thập nhân và ứng dụng trong các kỹ thuật thực nghiệm tiên tiến.

Thông số kỹ thuật

Đặc điểm

Hình và Bảng

Bảng 1. Các Yeasen Hạt ConA có tỷ lệ bắt giữ cao. Lượng Concanavalin A (ConA) được sử dụng theo tỷ lệ với các vi cầu đã được xác minh để đảm bảo khả năng liên kết tối đa trong khi ngăn ngừa sự kết tụ quá mức của các hạt từ tính sau khi liên kết tế bào trong các thí nghiệm CUT&Tag. Ví dụ, sử dụng 10 μL hạt phủ ConA có thể liên kết một lượng tế bào tương đương với mức E7, với hiệu quả liên kết vượt quá 98%.

Hình 1. Yeasen Hạt ConA cho thấy độ phân tán cao. Trong quá trình dán nhãn hạt, chất bịt kín không sinh học đã được chọn để đảm bảo đóng hiệu quả mà không bị ảnh hưởng bởi các biến thể theo từng lô. Điều này đảm bảo độ bịt kín tuyệt vời của hạt từ, duy trì độ phân tán đơn cao của chúng trong quá trình lưu trữ hạt phủ ConA, có lợi cho việc liên kết hiệu quả với các phân tử carbohydrate trong các thí nghiệm tiếp theo.

Hình 2. Phân phối tín hiệu chromatin CUT&Tag sử dụng Yeasen Hạt Con A.

Kho

Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ 2~8℃ trong vòng 2 năm.

Hướng dẫn

Các hoạt động sau đây lấy việc tinh chế glycoprotein hoặc phân lập tế bào làm ví dụ, Đối với CẮT & GẮN thí nghiệm , nhìn thấy Yeasen Cat# 12598ES cho giao thức.

1. Chuẩn bị đệm

1）Do khách hàng cung cấp

1. Vật liệu bắt buộc không bao gồm: Chân đế từ tính, ống Eppendorf, ống PCR, chân đế từ tính, máy luân nhiệt vân vân.
2. Cân bằng Hạt cườm ở nhiệt độ phòng trong ít nhất 30 phút. Làm loãng lại các hạt bằng cách lắc hoặc xoáy chai.

1. Xử lý mẫu（ lấy tế bào động vật có vú làm ví dụ )

1. Chuẩn bị tế bào động vật có vú (1.0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ tế bào), ly tâm (4℃，600×g, 3~5 phút) và cẩn thận bỏ đi phần dịch trong.
2. Thêm 140 μL đệm liên kết, trộn đều và huyền phù lại các tế bào, ly tâm và thu thập (4℃，600×g, 3~5 phút), cẩn thận bỏ đi phần dịch trong.
3. Thêm 90 μL đệm liên kết, trộn đều và huyền phù lại tế bào.
   Thận trọng: Có thể thu được các tế bào động vật có vú bám chặt bằng cách tiêu hóa một phần bằng enzyme như trypsin. Đối với mô động vật, tế bào thực vật hoặc tế bào nấm, việc thu được các tế bào phân tán hoặc tế bào nguyên sinh thường đòi hỏi các phương pháp xử lý đặc biệt phù hợp với đặc điểm cụ thể của chúng.

1. Chuẩn bị hạt ConA

1. Nhẹ nhàng hút các hạt ConA để huyền phù hoàn toàn, đặt 10 μL dung dịch hạt trong ống ly tâm 200 μL mới.
2. Thêm 40 μL đệm liên kết, trộn đều và để trên giá từ trong 1 phút, sau đó loại bỏ phần dịch trong sau khi các hạt từ hấp thụ vào thành ống ly tâm.
3. Thêm 10 μL đệm liên kết, trộn đều và huyền phù lại các hạt ConA.

1. Mẫu ràng buộc

1. Thêm mẫu tế bào đã chuẩn bị vào các hạt đã xử lý trước, nhẹ nhàng dùng pipet hút các hạt đã được huyền phù trở lại, sau đó ủ trên máy trộn đảo ngược (nhiệt độ phòng trong 30 phút hoặc 4℃ qua đêm).
2. Đứng trên giá từ trong 1 phút, đợi các hạt từ bám vào thành bên của ống ly tâm, cẩn thận loại bỏ phần dịch trong.
3. Thêm vào 500 μL đệm rửa giải vào phức hợp hạt tế bào-ConA và Nhẹ nhàng hút vào sau đó treo lại hạt Đứng trên giá từ trong 1 phút, đợi các hạt từ bám vào thành bên của ống ly tâm, cẩn thận loại bỏ phần dịch trong.
4. Lặp lại bước 3) thêm ba hoặc bốn lần nữa.

1. Giải hấp

1. Đối với glycoprotein, thêm 50~250 μL đệm rửa giải, nhẹ nhàng hút các hạt đã huyền phù, sau đó ủ trên máy trộn đảo ngược (nhiệt độ phòng trong 10~30 phút). Sau khi đảo ngược hỗn hợp, để trên giá từ trong 1 phút, thu thập phần dịch nổi vào ống 1,5 mL mới để thực hiện SDS-PAGE hoặc Western blot.
2. Đối với tế bào, không cần phải rửa giải.

Ghi chú

1. Cân bằng ConA hạt ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
2. Tránh đông lạnh, nếu không vật liệu hạt sẽ bị phân hủy hoặc mất hoạt tính.
3. ConA cần sự có mặt của các ion Ca2+ và Mn2+ để hoạt động, do đó, nên tránh sử dụng thuốc thử có chứa EDTA hoặc các chất tạo phức ion kim loại khác trong quá trình thí nghiệm.
4. Khi ủ với tế bào, các hạt ConA có thể kết tụ lại, đây là hiện tượng bình thường và không ảnh hưởng đến việc sử dụng hạt từ tính thông thường.
5. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu.
6. Vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để đảm bảo an toàn.

Thủ công