Sự miêu tả
RNA mạch kép (dsRNA) xuất hiện như một sản phẩm phụ trong quá trình phiên mã mRNA trong ống nghiệm. Sản phẩm phụ này sở hữu các đặc tính sinh miễn dịch trong cơ thể con người, có khả năng kích thích phản ứng miễn dịch, do đó làm giảm mức mRNA. Điều này khiến dsRNA trở thành một tạp chất gây phiền hà đòi hỏi phải loại bỏ triệt để và kiểm soát chặt chẽ sự hiện diện còn lại của nó.
Để giải quyết mối lo ngại này, bộ dụng cụ phát hiện RNA sợi đôi (dsRNA) ELISA sử dụng các nguyên tắc thực nghiệm của xét nghiệm miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA) dạng kẹp kháng thể kép để định lượng dsRNA còn lại. Bộ dụng cụ này không chỉ có thể được sử dụng để phát hiện các dsRNA thông thường mà còn có thể phát hiện peudo UTP, N1-Me-peudo UTP và dsRNA được sửa đổi bằng 5-OMe-UTP.
Quy trình này bao gồm việc thêm cả mẫu chuẩn và mẫu thử vào một đĩa enzyme (được chỉ định là 36717-A) trước đó đã được phủ kháng thể anti-dsRNA. Sau đó, các kháng thể phát hiện dsRNA được gắn biotin (36717-F) được thêm vào ở dạng pha loãng. Cuối cùng, Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36717-G) được đưa vào để tạo ra một phức hợp bao gồm kháng thể, kháng nguyên, biotin và SA-HRP.
Sau khi rửa đĩa, việc bổ sung dung dịch tạo màu TMB (36717-K) sẽ khởi tạo quá trình phát triển màu. Dưới ảnh hưởng của xúc tác enzyme HRP, TMB trải qua quá trình chuyển đổi từ không màu sang xanh lam, sau đó dừng lại thông qua việc áp dụng dung dịch dừng (36717-L). Cuối cùng, quá trình chuyển đổi này tạo ra màu vàng, cường độ của màu này tương quan tích cực với lượng dsRNA được xác định trong mẫu.
Bộ dụng cụ này có mục đích đa dạng, cho phép tối ưu hóa quy trình tinh chế sản phẩm sinh học, kiểm soát tạp chất trong các giai đoạn trung gian và thử nghiệm phát hành để đánh giá sản phẩm cuối cùng.
Psản phẩm Vsự phân chia Báo cáo
Thành phần
| KHÔNG. | Tên | 36717ES48 | 36717ES96 |
| 36717-A | Dải vi mô phủ Anti-dsRNA | 48 T | 96 T |
| 36717-B | STD 1: không sửa đổi, 5 ng/μL | 7,5 μL | 15 μL |
| 36717-C | STD 2: pUTP đã được sửa đổi, 5 ng/μL | 7,5 μL | 15 μL |
| 36717-D | STD 3: N1-Me-pUTP đã được sửa đổi, 5 ng/μL | 7,5 μL | 15 μL |
| 36717-E | STD 4: 5-OMe-UTP đã được sửa đổi, 5 ng/μL | 7.5 μL | 15 μL |
| 36717-F | Phát hiện Kháng thể: Liên hợp biotin Kháng thể (100x) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-G | Streptavidin-HRP (100 lần) | 60 μL | 120 μL |
| 36717-H | Đệm pha loãng 1 | 25 ml | 50 ml |
| 36717-Tôi | Dung dịch đệm pha loãng 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36717-J | Dung dịch đệm rửa đậm đặc (20×) | 20 ml | 40 ml |
| 36717-K | Chất nền TMB | 6 ml | 12 ml |
| 36717-L | Giải pháp dừng lại | 3 ml | 6 ml |
| 36717-M | Máy dán tấm | 2 | 4 |
Vận chuyển và lưu trữ
Bộ dụng cụ được vận chuyển kèm theo một túi đá và có thể bảo quản ở nhiệt độ 2°C ~8°C. Sản phẩm chưa mở có giá trị trong một năm. Sau khi mở thuốc thử, nó có giá trị trong nửa năm. Không bao giờ đông lạnh sản phẩm này.
Hướng dẫn
1. Chuẩn bị trước khi thí nghiệm
1) Các vật liệu thí nghiệm không có trong bộ dụng cụ này nhưng cần thiết cho thí nghiệm:
a. Đầu không chứa RNase;
b. Ống ly tâm không chứa RNase;
c. Giấy không bụi;
d. Đĩa xử lý mẫu không có RNase;
e. Nước khử ion hoặc nước cất hai lần.
2) Các dụng cụ và thiết bị cần thiết nhưng không được cung cấp:
a. Máy đọc vi mạch đa chức năng (bao gồm chế độ phát hiện bước sóng kép, bao phủ 450nm và 650nm; có khả năng sử dụng 450nm làm bước sóng phát hiện và 650nm làm bước sóng tham chiếu);
b. Máy rửa đĩa hoàn toàn tự động, máy trộn xoáy, máy trộn nhiệt độ không đổi, máy ly tâm;
c. Micropipet chính xác và micropipet đa kênh có các thông số kỹ thuật khác nhau;
d. Hẹn giờ, tủ lạnh 4℃;
e. Máy lắc vi đĩa.
2. Phân tích kết quả
a. Nếu giá trị OD của mẫu cần thử vượt quá giá trị OD tại điểm cao nhất của đường chuẩn, mẫu cần được pha loãng và đo lại.
b. Quy trình phát triển đường cong: Tạo đường cong chuẩn bằng cách vẽ các nồng độ chuẩn trên trục x và các giá trị hấp thụ chuẩn được hiệu chuẩn tương ứng trên trục y. Nhiều công cụ phần mềm vẽ và thống kê có thể hỗ trợ tạo đường cong chuẩn và xác định nồng độ mẫu chưa biết. Nên sử dụng phương pháp lắp bốn tham số hoặc năm tham số cho thí nghiệm này.Cuối cùng, tính toán lượng dsRNA còn lại trong mẫu bằng cách tham khảo đường cong chuẩn và xem xét hệ số pha loãng của mẫu.
c. Đường cong chuẩn được cung cấp là một ví dụ minh họa (chỉ nhằm mục đích tham khảo). Hàm lượng mẫu thực tế phải được xác định bằng cách sử dụng đường cong chuẩn được tạo riêng cho cùng một chuẩn thử nghiệm.
3. Sơ đồ thí nghiệm
Hình 5 Biểu đồ luồng thí nghiệm
4. Hiệu suất sản phẩm
Hiệu suất của bộ dụng cụ này đã được đánh giá đầy đủ. Để biết chi tiết, vui lòng liên hệ với nhân viên kỹ thuật để có được báo cáo xác minh hiệu suất tương ứng.
5. Ghi chú
- Vui lòng đọc kỹ hướng dẫn sử dụng này trước khi sử dụng bộ dụng cụ này.
- Vui lòng sử dụng sản phẩm này trong thời hạn hiệu lực và không được trộn lẫn các thuốc thử liên quan từ các lô khác nhau.
- Tất cả thuốc thử cần phải được đưa về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.
- Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần.
- Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu khoa học.
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.