Sự miêu tả
Thuốc thử chuyển gen PEI 25000 Polyethyleneimine tuyến tính hóa là một loại polyme cation tích điện cao, dễ dàng liên kết với các phân tử axit nucleic tích điện âm, tạo thành phức hợp và cho phép phức hợp này đi vào tế bào. Thuốc thử chuyển gen là thuốc thử chuyển gen tạm thời có độc tính tế bào thấp, hiệu quả chuyển gen cao và hiệu quả biểu hiện gen cao trong các tế bào như HEK293 và CHO. Người ta đã xác minh rằng thuốc thử chuyển gen PEI tuyến tính có thể áp dụng rộng rãi cho nhiều dòng tế bào khác nhau bao gồm tế bào HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 và Hela, v.v. Thuốc thử này tương thích với môi trường chứa huyết thanh và có thể đưa axit nucleic vào tế bào một cách hiệu quả.
Đặc điểm kỹ thuật
| Tên | Polyethylenimine tuyến tính (PEI) MW25000 |
| Số CAS | 9002-98-6, 26913-06-4 |
| Công thức phân tử | (CH2CH2NH)N |
| Trọng lượng phân tử | 25.000 |
| Vẻ bề ngoài | trắng hoặc bột màu vàng nhạt |
| Điểm nóng chảy | 73~75 ℃ |
| Độ hòa tan | Tan trong nước nóng, nước lạnh có độ pH thấp, methanol và ethanol. Không tan trong benzen, ether và acetone |
| Kết cấu |
|
Vận chuyển và lưu trữ
Sản phẩm được vận chuyển ở nhiệt độ phòng và bột có thể được bảo quản ở nhiệt độ 2-8ºC trong hai năm. Dung dịch gốc được bảo quản ở nhiệt độ 2-8ºC trong 3 tháng.
Thận trọng
1) Sau khi dung dịch PEI đã pha chế được lấy ra từ nhiệt độ -20 ºC và rã đông, có thể bảo quản trong tủ lạnh 4 ºC và không được đông lạnh lại.
2) Đối với hầu hết các tế bào, 3,0 μL thuốc thử chuyển gen PEI trên 1 μg DNA có thể đạt được hiệu quả chuyển gen cao. Bạn cũng có thể thử sử dụng thể tích 1,5~4 μL thuốc thử chuyển gen PEI tuyến tính trên 1 μg DNA để tối ưu hóa.
3) Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm, găng tay dùng một lần và mũ trùm đầu khi vận hành.
4) Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu khoa học, không dùng cho con người.
Chuẩn bị dung dịch gốc (1 mg/mL)
1. Vật liệu
PEI 25000, nước Milli-Q®/nước pha tiêm (WFI) hoặc nước sinh học tương tự, axit clohydric (HCl) 12 mol/L, natri hydroxit (NaOH) 10 mol/L, bộ lọc chân không vô trùng PES dùng một lần 0,1~0,2 μm, chai đựng vô trùng bằng HDPE hoặc polypropylene.
2. Chuẩn bị dung dịch gốc (1 mg/mL)
1) Trong cốc thủy tinh 1 L, thêm 1 g bột PEI 25000 vào 900 mL nước siêu tinh khiết Milli-Q® hoặc nước sinh học tương đương khác, và khuấy đều trên máy khuấy từ để tạo thành một dòng xoáy nhỏ.
2) Thêm từng giọt axit clohydric (12 mol/L) trong khi khuấy để điều chỉnh pH cho đến khi pH < 2,0.
3) Đậy nắp cốc và khuấy trong 3 giờ cho đến khi tan hoàn toàn; giữ độ pH < 2,0 trong suốt quá trình.
【Lưu ý】: Có thể có một số hạt xơ nhỏ không thể hòa tan, đây là hiện tượng bình thường.
4) Thêm từng giọt NaOH (10 mol/L) trong khi khuấy để điều chỉnh độ pH cho đến khi đạt 6,9 ~ 7,1.
5) Đổ dung dịch vào bình chia độ và thêm nước cho đến khi đủ 1 lít.
6) Lọc và khử trùng bằng bộ lọc chân không PES dùng một lần 0,1-0,2 µm để thu được dung dịch gốc 1 mg/mL.
7) Chia thành từng phần nếu cần và bảo quản ở nhiệt độ -20 °C, ổn định trong 1 năm.
【Lưu ý】: Sau khi rã đông dung dịch bảo quản, có thể bảo quản ở nhiệt độ 4 °C và ổn định trong 2 tuần, nhưng không được đông lạnh lại.
Quy trình chuyển gen (lấy đĩa 6 giếng làm ví dụ)
1. Cấy tế bào: Để nâng cao hiệu quả chuyển gen, khuyến cáo nên cấy tế bào một ngày trước khi chuyển gen và mật độ tế bào tại thời điểm chuyển gen tốt nhất là 70%~80%.
2. Chuẩn bị phức hợp DNA-PEI: Chuẩn bị phức hợp thuốc thử chuyển gen axit nucleic DNA-PEI theo hệ thống sau:
1) Đối với mỗi giếng tế bào, pha loãng 2 μg DNA mục tiêu với 100 μL môi trường không có huyết thanh và trộn đều để tạo thành dung dịch pha loãng DNA.
[Lưu ý]: Opti-MEM hoặc ddH2O được khuyến nghị cho chất pha loãng không có huyết thanh
2) Ngay lập tức thêm 5 μL thuốc thử chuyển gen PEI 25000 vào 100 μL chất pha loãng DNA, lắc trong 10 giây và trộn đều.
3) Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10-25 phút để tạo thành phức hợp thuốc thử chuyển gen axit nucleic cation DNA-PEI.
3. Tế bào được chuyển gen:
1) Trong quá trình hình thành phức hợp, loại bỏ môi trường tăng trưởng tế bào và thêm 2 mL môi trường hoàn chỉnh mới đã được làm ấm trước vào mỗi giếng.
2) Thêm 100 μL phức hợp axit nucleic-PEI DNA-PEI trực tiếp vào tế bào, lắc đĩa nuôi cấy và trộn nhẹ.
3) Nuôi cấy trong tủ ấm 37°C, 5% CO2, có thể phát hiện biểu hiện của gen chuyển ngay sau 7 giờ chuyển gen. Vui lòng tự xác định thời gian thử nghiệm phù hợp.
4. Kiểm tra xoay vòng ổn định (tùy chọn)
24 giờ sau khi chuyển gen, các tế bào được nuôi cấy lại vào môi trường tăng trưởng mới (pha loãng tế bào hơn 10 lần) và ủ qua đêm ở 37 °C trong tủ ấm CO2 5%. Ngày hôm sau, một loại thuốc sàng lọc phù hợp với gen kháng chuyển gen được thêm vào. Các dòng kháng thuốc có thể được sàng lọc trong khoảng 1 đến 2 tuần. Trong thời gian này, môi trường tăng trưởng chứa thuốc sàng lọc cần được thay thế thường xuyên.
Liều lượng chuyển gen cho các bình nuôi cấy tế bào khác nhau (chỉ mang tính tham khảo):
| Văn hoá tàu | Lướt sóng. khu vực mỗi giếng*(cm2) | ADN(μg) | Chuyển gen thuốc thử (μL) | Tập của pha loãng trung bình **(μL) | Tập của mạ trung bình |
| 96 giếng | 0,3 | 0,1 | 0,1 | 10 | 100μL |
| 48 giếng | 0,7 | 0,2 | 0.3 | 20 | 200μL |
| 24 giếng | 1.9 | 0,5 | 1 | 50 | 500μL |
| 12 giếng | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
| 6 giếng | 10 | 2 | 4 | 100 | 2mL |
| Bình đựng nước 25cm² | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 ml |
| Bình đựng nước 75cm² | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 ml |
Trích dẫn & Tài liệu tham khảo:
[1] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Cơ chế phân tử của chủ vận và chủ vận ngược trong thụ thể ghrelin. Nat Commun. 2022;13(1):300. Xuất bản ngày 13 tháng 1 năm 2022. doi:10.1038/s41467-022-27975-9(NẾU: 14.919)
[2] Wang Y, Chen J, Gao WQ, Yang R. METTL14 thúc đẩy quá trình hình thành khối u tuyến tiền liệt bằng cách ức chế THBS1 thông qua cơ chế phụ thuộc m6A-YTHDF2. Cell Death Discov. 2022;8(1):143. Xuất bản ngày 30 tháng 3 năm 2022. doi:10.1038/s41420-022-00939-0(NẾU: 5.241)
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.