GMP RNase R：在圆形RNA研究中解锁新动量！

环状RNA（circRNA）是一类独特的非编码RNA分子，它们通过一种称为反向剪接的机制形成，前体mRNA的两个外显子在剪接过程中连接成闭环结构，从而避免了线性RNA分子中常见的5'帽子和3'尾巴结构。 这种环状结构赋予circRNA较高的稳定性，使其在细胞内不易被核酸酶降解，因此在细胞内具有较长的半衰期，在实际应用中可以实现低剂量、长效的作用。 此外，circRNA 具有生产过程相对简单的优势，因为它不需要 这 修饰核苷酸 封端或多聚腺苷酸化，使环状RNA成为药物开发的热点。

在药物开发方面具有显著优势，具体包括： 上市 以下：

01 更高的稳定性

circRNA 的结构使其能够抵抗核酸酶的降解，因此 它具有较长的半衰期和在细胞内较高的稳定性，这对于药物的持续作用至关重要。

02 低免疫原性

与线性RNA相比，circRNA的免疫原性更低，降低了发生免疫反应的可能性，使其更适合作为药物载体。

03 高效蛋白质表达

研究表明，工程化的环状RNA可以在真核细胞中稳定高效地表达蛋白质，这对于蛋白质替代疗法尤为重要。

04 潜在的疾病治疗应用

circRNA已显示出在各种疾病的治疗中发挥的潜力，包括罕见疾病、癌症治疗以及作为疫苗开发的一部分。

05 创新交付系统

新开发的递送系统，如脂质纳米颗粒（LNPs），可以有效地将circRNA递送至靶细胞，这对于药物的靶向和疗效至关重要。

06 疫苗研发

circRNA疫苗在COVID-19疫苗研发中展现出潜力，能够诱导产生更多的中和抗体和有效的T细胞反应，并且与线性mRNA相比在常温下更稳定，有助于简化储存和运输条件。

07 基因编辑

circRNA在基因编辑领域也展现出潜力，能够作为基因编辑系统的模板，提供更持久、稳定的蛋白质表达。

circRNA的生产过程包括：模板准备、体外转录、DNA模板的去除、环化、纯化。 RNA环化后，非环化的RNA需要用核糖核酸酶R（RNase R）消化以富集circRNA。

Yeasen 拥有双向分子酶合理设计及定向进化平台，以及专门针对GMP级别产品设计的分子酶生产基地。 开发生产纯度高、消化活性强的GMP级RNase R产品，为新型RNA疫苗/药物的上市提供支持。

图1：环状RNA生产过程图

（来源：Front Immunol 2023 年 1 月 12 日：13：1091797。doi：10.3389/fimmu.2022.1091797。eCollection 2022。）

RNase R (核糖核酸酶 R, RNase R) 是一种 Mg2+ 依赖性的 3'→5' 外切核糖核酸酶，来源于 大肠杆菌它可以消化所有线性RNA，但难以消化circRNA、Lasso RNA、 或3'端突出的核苷酸少于7个的双链RNA分子。 RNase R通常用于去除线性RNA分子，达到富集环状RNA、套索RNA等非线性RNA的目的。

主要应用 区域 是：

  • 基因表达研究；
  • 可变剪接的研究；
  • 从生物样本中富集circRNA；
  • 识别内含子套索结构RNA；
  • 识别外显子环状RNA。

产品特性

  • 蛋白纯度（SDS-PAGE）≥95%；
  • 无外切酶残留；
  • 与竞争对手相比，该产品具有同等的线性RNA消化能力；
  • 与竞争对手相比，该产品对circRNA富集具有相似的效果。

性能演示

蛋白纯度（SDS-PAGE）≥95%

图2：蛋白质纯度测试： 从左到右，结果为同一产品浓度的不同体积（1 μL、2 μL、3 μL）。结果表明， Yeasen RNase R产物≥95%。

无外切酶残基

图3：核酸外切酶残留检测： 添加 20 U Yeasen 将0.5 μg λDNA-Hind III消化液加入RNase R中，37℃孵育4小时，然后进行琼脂糖凝胶电泳，结果显示DNA条带没有变化，说明DNA片段中没有残留的外切酶。 Yeasen RNase R 产品。

与进口品牌RNase R产品在消化线性RNA方面相当

图 4： Yeasen RNase R产品和进口厂家的RNase R产品消化线性RNA时： Yeasen 将RNase R产品和进口厂家A的RNase R产品分别加入到含有线性RNA底物的反应体系中，结果发现当RNase R产品加入量达到2~4 U时，RNA条带开始变弱甚至消失，说明RNase R对线性RNA分子有消化作用。此外，RNase R的消化能力 Yeasen RNase R产品与进口厂家A的RNase R产品对线性RNA分子的检测结果相当。

相当于A家进口品牌RNase R产品的circRNA富集效果

图5：circRNA的富集效果比较 Yeasen RNase R产品与进口厂家RNase R产品A：含circRNA底物的反应体系与 Yeasen 分别用进口厂家A的RNase R产品和纯化的RNA酶处理后, RNA条带的亮度无明显变化。 Yeasen公司的RNase R产品与进口厂家A的RNase R产品进行比较，表明circRNA能够耐受RNase R的消化。 上述结果证实了 Yeasen 产品与进口厂家的RNase R产品均可有效用于circRNA的富集。

客户反馈

是宜生 RNase R对线性RNA的切割效果相较于其他品牌有更好的表现。

图6：RNase R消化对线性mRNA分子的影响比较 Yeasen 产品和制造商A和B：反应是通过添加 Yeasen 将RNase R产品与A、B厂商的RNase R产品分别加入到含有1 μg线性mRNA底物的反应体系中，结果表明 Yeasen RNase R产品对线性RNA的消化效率与厂家A和B的RNase R产品相比有更好的表现。

产品信息

产品名称

产品代码

产品规格

RNase R GMP 级（20 U/μL）

14615ES

500U/5000U/20KU/200KU

10×RNase R反应缓冲液GMP级

14616ES

500 微升/1 毫升/5 毫升/10 毫升/100 毫升

参考

1.曲丽，易志，沉Y，等。针对 SARS-CoV-2 和新出现变种的环状 RNA 疫苗。 Cell. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044

2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. 用于发现和分析circRNA的生物信息学工具箱。 简报生物信息。2021；22(2):1706-1728。doi:10.1093/bib/bbaa001

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