随着生物技术的飞速发展，mRNA治疗作为一种新兴的治疗方法，因其可编程性强、反应速度快而备受关注。在mRNA疫苗和基因治疗领域，高效合成高质量mRNA是实现治疗目标的关键步骤。在此过程中，T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）起着至关重要的作用，它能高效催化mRNA的体外合成。
尽管 T7 RNAP 在 mRNA 合成中起着至关重要的作用，但在实践中它经常会产生双链 RNA (dsRNA) 作为副产物。dsRNA 是许多病毒的标志之一，因此很容易被细胞内的 dsRNA 结合蛋白识别，从而引发先天免疫反应和炎症反应。这意味着，如果 mRNA 制剂含有较高水平的 dsRNA，可能会导致不必要的免疫激活，从而影响治疗效果或引起严重的副作用。过量的 dsRNA 还会干扰 mRNA 的正常功能，包括翻译效率和 mRNA 稳定性，间接影响 mRNA 治疗的有效性。
图 1：dsRNA 副产物的影响和优化的 T7 RNAP 反应。
因此，开发和采用有效的方法来减少dsRNA的产生是mRNA技术发展的关键部分。研究人员已经开发了各种策略，包括使用改进的T7 RNA聚合酶、修饰核苷酸、优化IVT转录缓冲液和下游纯化工艺。
产品数据
产量：超过 9 mg/mL
dsRNA含量：dsRNA含量显著降低至少10倍
封盖效率：99%以上
低 dsRNA T7 RNA 聚合酶 筛选流程：
1）构建了随机文库及FADS高通量筛选方法，建立了10个以上随机突变文库^6 进行了放映。
2）采用半理性设计和微孔板技术筛选位点饱和文库，两种方法均得到低dsRNA的T7 RNA聚合酶突变体，在保证其他指标不降低（如完整性/封盖效率/产量等）的情况下，兼顾dsRNA含量， 选择了几种突变体，其中一个名为CleaScrip™T7的突变体用于商业应用。
产品数据
在不同长度的应用场景中，低dsRNA T7 RNA Polymerase与WT T7及竞争产品相比均表现出了高度显著的降低，同时保证了产量和完整性不降低。
| 片段长度 | T7 RNA聚合酶 | 屈服（毫克/毫升） |
正直（％） | dsRNA 含量（每 1ug RNA 产生的 dsRNA ng 数） |
| 4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
| 清洁文具™ T7 | 12.1 | 89.9 | 0.0129 | |
| A公司 | 11.0 | 87.8 | 0.0323 | |
| 9千 | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
| 清洁文具™ T7 | 9.0 | 82.0 | 0.0379 | |
| A公司 | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
使用 封端浓度为 2.5 mM 时，与 WT 相比，仍可在不同的片段长度上实现出色的封端效率。此外，在细胞水平上也观察到了优异的蛋白质表达性能。
| Cap模拟输入（毫米） | 封盖效率（％）4K | |
| 野生型 | 低 dsRNA | |
| 10 | 100 | 100 |
| 5 | 100 | 100 |
| 2.5 | 100 | 100 |
已在美国提交专利。
产品信息
| 产品名称 | 目录编号 | 规格 | 体积 |
| 克利斯克里普商标 T7 RNA聚合酶 （低 dsRNA，250 U/μL） | 10628ES | 100 /2500 /25,000KU | 400 μL/10 毫升/100 毫升 |
| 10629ES | 100 /2500 /25,000KU | 400 μL/10 毫升/100 毫升 |