親愛的朋友們，在蛋白免疫印跡實驗中，您是否面對著各式各樣的Loading Control和Epitope Tagging Antibodies而不知所措呢？上樣控制蛋白質由生物體中的管家基因編碼，並在多種組織中穩定表現。用於驗證免疫學實驗是否正常進行，以及作為蛋白質表現的半定量檢測標準。那麼，該如何正確選擇內參抗體呢？您可以參考以下幾點。

一、樣本物種來源

哺乳動物組織或細胞樣本，一般選擇β-actin、α-tubulin、GAPDH、Lamin-B、Histone H3、Na+/K+-ATPase。
植物來源的樣品，一般選擇植物肌動蛋白、Rubisco等。
其他研究較少的樣本，透過查閱相關文獻或資料庫，選擇合適的蛋白質作為內參。

二.目標蛋白的分子量

確保目標蛋白的分子量與上樣對照的分子量不同大於5KDa以防止偵測過程中的干擾。例如，如果目標蛋白為40KDa，則不適合選擇β-actin（42KDa）作為內參。考慮使用 GAPDH (36KDa) 或 β-tubulin (55KDa) 作為上樣對照。

三內參蛋白的表達位點

因此，選擇載入控制蛋白質隨蛋白質萃取部位的不同而變化。例如，當分別萃取細胞質和核蛋白而不是總蛋白時，選擇上樣對照在對應位點表現的蛋白質。例如，H3 在細胞核中高度穩定地表達，理論上不在細胞質中表達。因此，對於細胞質蛋白質萃取，H3不應用作內參蛋白質。而是選擇β-actin，GAPDH，α-Tubulin等在細胞質中表現的蛋白質作為內參蛋白。

注意：使用時避免以下情況 上樣對照抗體

亞細胞定位	上樣對照蛋白	分子量（KDa）	筆記
細胞質，整個細胞	β-肌動蛋白	四十二	不適用於核提取物。 β-肌動蛋白是染色質重塑複合物的組成部分；可能不適用於研究對象間有顯著年齡差異的情況。
	α-微管蛋白	55	不適用於研究對象年齡差異較大的情況。微管蛋白的表達會隨著抗菌和抗有絲分裂藥物而改變，因此在添加抗癌和抗真菌藥物時不適合。
	β-微管蛋白	55
	磷酸甘油醛去氫酶	三十六	細胞缺氧會導致GAPDH表現增加，因此不適合進行與氧氣相關的研究。糖尿病等因素會導致 GAPDH 表現增加。
	紐蛋白	117	可以作為大分子量蛋白質的參考。
粒線體	COXIV系列	15-17	此系列蛋白質主要集中在15-17KDa。如果目標蛋白分子量接近，請考慮使用其他上樣控制抗體。
粒線體	熱休克蛋白60	60
核	電壓類比轉換器1/2	31-37	此系列蛋白質主要集中在31-37KDa。
	層蛋白B1	66	不適用於胚胎幹細胞，不適合作為上樣對照在細胞凋亡實驗中。
	增生細胞核抗原	三十六	不適用於非增殖細胞。
	三丁基苯胺	33-43	TBP在人類為37-43KDa，在小鼠和大鼠為33-36KDa，不適合用於細胞凋亡實驗。
	YY1	65-70
	組蛋白H3	17	大多數蛋白質的分子量約為17KDa。如果目標蛋白分子量接近，可考慮添加其他對照抗體。
全血、血清、血漿	轉鐵蛋白	77	表達受某些疾病狀態和治療的影響，例如視黃酸。
全血、血清、血漿	白蛋白	66	含量極高，WB實驗時注意減少上樣量。

標記抗體一起使用效果更佳

在研究蛋白質相互作用的實驗中，例如下拉實驗，表位標籤可以透過分子生物學方法融合到目標蛋白質的N或C端。常用的表位標籤包括 His、HA、Myc 和 GST。這些表位標籤通常不會影響目標蛋白的生物活性和細胞內定位。表位標籤的出現為科學研究和工業生產提供了便利。

表位標籤	標籤序列	分子量（鉀通道）
HA 標籤	異丙基苯並噻嗪	1.1
Myc標籤	艾克斯	1.2
旗幟標籤	韓國	1
GST 標籤	-	二十六
GFP標籤	-	26.9
V5標籤	國標	1.4
麈	凱塔克費QHMDS	1.8
電子標籤	人人都愛的	1.4

產品資訊

類型	產品名稱	分子量（鉀通道）	產品編號
上樣對照抗體	β-肌動蛋白，小鼠 mAb	四十二	30101ES
	β-肌動蛋白，兔多克隆抗體	四十二	30102ES
	GAPDH（克隆：1A6），小鼠 mAb	三十六	30201ES
	GAPDH，兔多株抗體	三十六	30202ES
	α-微管蛋白，小鼠 mAb	50-55	30304ES
	β-微管蛋白，小鼠 mAb	50-55	30301ES
	β-微管蛋白，兔多克隆抗體	50-55	30302ES

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