什麼是二抗?
二抗是可以與一抗結合的抗體。主要用於檢測一抗的存在。一抗特異性地與抗原結合,二抗特異性地與一抗結合。也就是說,一抗的Fc區或Fab片段可以當抗原,刺激身體產生抗體。也就是說一抗主要是IgG類免疫球蛋白,所以二抗就是抗IgG的抗體。
二抗的作用
一抗是與目標蛋白特異性結合的,一抗需要標記發光物質或顯色基。用肉眼無法看出一抗 綁定 蛋白質。但一抗特異性比較強,且每個抗體標記成本較高。通常使用標記的二抗,該二抗可以與一抗結合,並具有可檢測的標記(例如螢光、放射性、化學發光或髮色基團)。因此目前的設計一般是二抗帶有可檢測的標記來檢測一抗,而一抗則識別底物。這樣,當一抗與底物結合時,就可以透過二抗體檢測到。
例如ECL發光原理:在ECL底物中,有H2哦2 以及魯米諾(及其衍生物),在HRP(辣根過氧化物酶)作用下發出螢光。
使用二抗體的要點
二抗是用一抗種屬(如兔、小鼠)的某一亞型的免疫球蛋白IgG免疫哺乳動物(通常免疫山羊、馬、驢、騾和豚鼠等)產生的抗體,因此二抗只與特定的一抗種屬和亞型結合。例如,羊抗鼠(二抗)會特異性地與鼠單株(一抗)結合,而不會與兔多克隆或大鼠單株結合。
二抗偶聯標記
不同的實驗方法會導致二抗所偶聯基團不同,主要有酵素(辣根過氧化物酶/HRP和鹼性磷酸酶/AP)、螢光基團(FITC、Rhodamine、PE、Dylight、Alexa Fluor、cy3等)、生物素、金顆粒等。 TC、PE等。
如何選擇合適的二抗
一個。免疫印跡 (WB)
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對於傳統的Western印跡法,選擇標記有辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶的二抗體;對於螢光Western印跡法,選擇標記有相應螢光團的二抗體。
b.免疫組織化學(IHC/ICC)
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B. 對於 ICC(免疫細胞化學),選擇用生物素標記的二抗體。
C. 免疫螢光(IHF/ICF)
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免疫沉澱通常允許選擇使用 Fc 或 Fab 特異性的二抗體。此類二抗可以避免重鏈(分子量55kDa)或輕鏈(分子量25kDa)的干擾。
推薦產品資訊
標籤組 | 產品編號 | 產品名稱 |
未標記 | 34850ES | 山羊抗兔 lgG(H+L) |
34851ES | 山羊抗鼠lgG(H+L) | |
34847ES | 驢抗人IgG(H+L) | |
辣根過氧化物酶 | 33101ES | 過氧化物酶 AffiniPure 山羊抗兔 IgG (H+L) |
33201ES | 過氧化物酶 AffiniPure 山羊抗鼠 IgG (H+L) | |
33301ES | 過氧化物酶 AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L) | |
33401ES | 過氧化物酶 AffiniPure 山羊抗豚鼠 IgG(H+L) | |
33501ES | 辣根過氧化物酶山羊抗人 IgG (H+L) | |
33701ES | 過氧化物酶 AffiniPure 兔抗山羊 IgG (H+L) | |
33801ES | 過氧化物酶 AffiniPure 兔抗羊 IgG (H+L) | |
34201ES | 過氧化物酶 AffiniPure 驢抗兔 IgG (H+L) | |
34101ES | 過氧化物酶 AffiniPure 驢抗鼠 IgG (H+L) | |
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33101ES | 過氧化物酶 AffiniPure 山羊抗兔 IgG (H+L) | |
綠色螢光 | 33106ES | YSFluor™ 488 山羊抗兔 IgG (H+L) |
33126ES | YSFluor™ 488 山羊抗人 IgG (H+L) | |
33206ES | YSFluor™488 山羊抗鼠 IgG (H+L) | |
33306ES | YSFluor™ 488 山羊抗牛 IgG (H+L) | |
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33706ES | YSFluor™488 兔抗山羊 IgG (H+L) | |
33906ES | YSFluor™ 488 兔抗鼠 IgG (H+L) | |
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34506ES | YSFluor™488 驢 抗豚鼠 IgG (H+L) | |
34606ES | YSFluor™488 驢 抗雞 IgG (H+L) | |
34706ES | YSFluor™488兔抗雞IgY(H+L) | |
34806ES | YSFluor™488 驢抗人 IgG (H+L) | |
34856ES | FITC AffiniPure 山羊抗人 IgG(H+L) | |
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羅丹明 | 33109ES | 羅丹明 (TRITC) 山羊抗兔 IgG (H+L) |
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橘色螢光 | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure 山羊抗兔 IgG (H+L) |
33212ES | YSFluor™ 594 山羊抗鼠 IgG (H+L) | |
33222ES | YSFluor™ 594 山羊抗人 IgG (H+L) | |
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33712ES | YSFluor™594 兔抗山羊 IgG (H+L) | |
33812ES | YSFluor™ 594 兔抗羊 IgG (H+L) | |
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34712ES | YSFluor™594 兔抗雞 IgY (H+L) | |
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33208ES | Cy3-AffiniPure 山羊抗鼠 IgG (H+L) | |
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紅色螢光 | 33113ES | YSFluor™647 山羊抗兔 IgG (H+L) |
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參考
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