介紹
螢光素酶報告基因檢測試劑盒作為藥物研發中不可或缺的核心工具,能夠即時監測基因表現和訊號傳導,在高通量篩選、療效評估、標靶驗證等關鍵環節中發揮至關重要的作用。該技術的應用顯著提高了藥物篩選和評估的效率,並加速了新藥的發現和開發。
螢光素酶報告基因檢測原理
螢光素酶報告基因檢測技術透過催化螢光素氧化為氧化螢光素並產生生物發光,可以定量分析螢火蟲螢光素酶活性。此技術在miRNA標靶基因驗證、啟動子轉錄活性調控等領域具有重要的應用價值。透過在螢光素酶基因的上游和下游插入目的基因的調控元件,建構螢光素酶報告質粒,轉染細胞並給予相應的刺激或處理。隨後透過裂解細胞並測定螢光素酶活性,可以評估不同刺激條件下調控元件的活性變化,從而更深入了解基因的調控機制 表達。
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單螢光素酶和雙螢光素酶檢測應用之間的差異
報告基因檢測主要分為單螢光素酶報告基因檢測及雙螢光素酶報告基因檢測。在具體應用中,如何確定實驗使用的是單螢光素酶還是雙螢光素酶檢測系統?讓我們來看看它們的差異。
單螢光素酶報告基因檢測系統
報告基因數量: 單一螢火蟲螢光素酶報告基因;
轉染類型: 單一報告基因質粒,經轉染後以藥物篩選,建構穩定表現螢光素酶的報告基因細胞株;
檢測流程: 只需檢測螢火蟲螢光素酶訊號,操作簡單,檢測週期短,適合高通量藥物篩選;
應用場景分析: 通常是透過建構穩定的過度表現單株細胞系來實現的,因為這些細胞系的表現量相對穩定且均勻,不受轉染效率和細胞活力等實驗變化的影響。操作簡單,且由於只偵測螢火蟲螢光素酶訊號,數據分析更方便。加上檢測時間短的優勢,特別適合高通量藥物篩選,滿足大規模樣本檢測的需求。
雙螢光素酶報告基因檢測系統
報告基因數量: 螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶雙報告基因;
轉染類型: 兩個報告基因質粒共轉染,主要透過瞬時轉染方式;
檢測流程: 需要先偵測螢火蟲訊號,再偵測海腎訊號,並將兩者的比值(螢火蟲/海腎)用於最終的資料計算;
應用場景分析: 一般是透過瞬時轉染的方式,以共轉染的含有海腎螢光素酶基因的質粒作為內參,為實驗提供基準,進而減少細胞活力、轉染效率等外在因素的干擾。透過比例計算,可以校正細胞數量、轉染效率和細胞活性的變化,並提高實驗結果的準確性。它是基因表現調控、訊號傳導路徑和藥物篩選領域的重要工具。
產品系列
產品名稱 | 生物一步法 | 穩紮穩打 | 明亮-一步 |
產品代碼 | |||
應用場景 及特色 | 該套件在訊號強度和穩定性之間取得了相對的平衡。它能維持較高的訊號強度,同時在一定時間內保持訊號強度相對穩定。 | 半衰期可持續5小時以上。特別是在最初的2小時內,發光值變化很小。它適用於超高通量或 384 孔板分析。 | 高靈敏度和高訊號強度。適用於需要高靈敏度的實驗。 |
訊號半衰期 | 60 分鐘 | 5 小時 | 30分鐘 |
操作特性 | 一步 | 一步 | 一步 |
產品優勢
訊號半衰期長: 訊號半衰期可達5小時以上,滿足高通量實驗的需求,同時避免因樣本數量多導致首孔與末孔時間差而造成的訊號差異,確保結果更穩定可靠。
強螢光訊號: 訊號值可達8個數量級,為早期藥物篩選、療效評估提供了較大的檢測窗口和有力的數據支持。
操作簡便: 一步操作,避免了複雜的實驗步驟。只要加入檢測試劑,等待5分鐘,即可啟動機器進行檢測。
多種選擇: 根據不同的應用場景,有3種不同的產品可供選擇,可依實驗對訊號值、訊號穩定性的要求進行選擇。
產品數據
01 效能比較
三種檢測試劑盒的驗證 在穩定表達螢火蟲螢光素酶的細胞株上進行了實驗,結果顯示Bright-One Step產品具有更高的訊號值; Steady-One Step產品訊號半衰期較長,訊號較穩定; Bio-One Step產品不僅具有高訊號值,還能維持較長的訊號半衰期。
圖 1. 不同
02
使用時
圖 2. 比較
03
圖 3.反覆凍融試驗
操作流程
01 細胞轉染
將試劑直接加入細胞懸浮液中,然後上下移液5次,確保充分混合,等待5分鐘以完全裂解細胞。
02 樣品加載
將混合物(檢測試劑+細胞培養基)100 μL 移入檢測板的每個孔中。
03 螢光檢測
設定讀板機上的參數。將檢測板放入酶標儀中,震動幾秒鐘,然後進行檢測。
產品列表
產品類別
| 產品名稱 | 產品代碼 | 產品規格 |
螢光素酶報告基因檢測試劑盒 | 11411ES60/80/81 | 100噸/10×100噸/1000噸 | |
11413ES60/80/81 | 100噸/10×100噸/1000噸 | ||
11412ES60/80/81 | 100噸/10×100噸/1000噸 | ||
雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒
| 11402ES60/80 | 100噸/1000噸 | |
11405ES60/80 | 100噸/1000噸 |