產品介紹
膠原蛋白酶是一類能特異辨識Pro-X-Gly-Pro序列(此序列在膠原蛋白中常出現,而其他蛋白質中很少出現)並裂解此序列中中性胺基酸(X)與甘胺酸(Gly)之間的勝肽鍵,並能水解結締組織中的膠原蛋白的內切酶。
許多蛋白酶都能水解單鏈和變性的膠原蛋白肽,但膠原蛋白酶是唯一能降解三鏈超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶,廣泛存在於結締組織中,其中最強效的是厭氧菌溶組織梭菌所分泌的「粗」膠原酶。
目前,市面上的細菌膠原酶根據膠原蛋白酶活性的不同主要分為五種類型:I型膠原酶、II型膠原酶、III型膠原酶、IV型膠原酶和V型膠原酶。
膠原酶的選擇
產品名稱 | 外貌 | 酵素活性 | 適用範圍 |
I型 膠原蛋白酶) | 棕色或棕褐色結晶粉末 | ≥250單位/毫克固體 | 含有(膠原蛋白酶、酪蛋白酶、梭菌和胰蛋白酶)活性,用於分離上皮、肺、脂肪和腎上腺組織細胞。 |
II 型 膠原蛋白酶) | 棕色或棕褐色結晶粉末 | ≥125單位/毫克固體 | 含有較多的梭菌酶活性,適用於肝臟、骨骼、甲狀腺、心臟和唾液腺組織細胞的分離 |
III型 膠原蛋白酶) | 棕色或棕褐色結晶粉末 | ≥100單位/毫克固體 | 含有低蛋白水解活性,對消化組織連接部分有效,常用於哺乳動物組織細胞的解離 |
類型IV 膠原蛋白酶) | 棕色或棕褐色結晶粉末 | ≥125 CDU/毫克固體* | 胰蛋白酶活性較低,常用於細胞製備以確保胰島和受體的完整性 |
V型 膠原蛋白酶) | 棕色或棕褐色結晶粉末 | ≥125 CDU/毫克固體* | 含有至少7種蛋白酶成分,可用於胰島組織的分離及結締組織分離成單一細胞 |
*CDU = 膠原蛋白消化單位
產品特性
- 消化效率高:溶組織梭菌粗酵素萃取物對組織有很高的消化效率。
- 依賴活化劑:膠原蛋白酶需要依賴二價陽離子(如 Ca2+和鋅2+。
- 受抑制劑的影響:膠原蛋白酶的抑制劑有EDTA、EGTA等;第二是重金屬離子(Hg2+, 鉛2+, 光碟2+(英文):還有一些化學藥劑如半胱胺酸、組胺酸、DTT、2-巰基乙醇、鄰菲咯啉等,對膠原蛋白酶也有抑製作用。
- 抗干擾性強:膠原蛋白不會受到培養細胞所用血清的影響。
使用注意事項
- 使用方法:溶於Hank's、Earle's或其他平衡鹽溶液,建議使用濃度為0.05%~0.5%(w/v)
- 儲藏溫度:2-8℃
- 使用建議:
(1) 對於膠原蛋白結構和生物合成的研究,通常使用純度較高的膠原蛋白酵素製劑,而不使用其他蛋白水解活性物質。
(2)對於組織解離,通常使用粗膠原蛋白酶製劑,例如彈性蛋白酶,胰蛋白酶或木瓜蛋白酶。
常問問題
- 實驗期間消化不良
(1)若因酵素活弱或鈣離子不足引起,膠原蛋白酶應保存在低溫乾燥條件下,膠原酶溶液分裝後應冷凍保存
(2)如果是鈣離子不足引起的,膠原蛋白酶溶液中鈣離子濃度應為5mM
- 使用過程中發生細胞死亡
(1)若蛋白酶過量,應減少蛋白酶接觸時間或加入白蛋白或滅活血清
(2)如果pH值發生變化,則應使用緩衝液(例如HBSS);經常檢查並重新調整pH值
(3)若氧氣過少,應使用無菌空氣對消化液進行通氣
- 實驗過程中細胞受損
如果是蛋白酶過多引起,應減少蛋白酶量或加入白蛋白或滅活血清
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目錄編號 | 產品名稱 | 尺寸 |
40507ES60 | 膠原蛋白酶I | 100 毫克,1克 |
40508ES60 | 膠原蛋白酶 II | 100 毫克,1克 |
40509ES60 | 膠原蛋白酶 III | 100 毫克 |
40510ES60 | 膠原蛋白酶IV | 100 毫克,1克 |
40511ES60 | 膠原蛋白酶V | 100 毫克 |
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