背景—什麼是 ROS
活性氧(ROS)是細胞代謝的正常產物-一類含氧的生物活性分子,包括過氧化物、超氧化物、羥基自由基、單線態氧和α氧等,在細胞訊號路徑和轉錄中扮演重要的調控作用,如細胞凋亡、自噬、老化、癌症等。
ROS 濃度對細胞的影響-為什麼要檢測 ROS?
在活性氧水平較低時,ROS作為「氧化還原信使」參與細胞內訊號傳導和調控。然而,在環境壓力(例如電離輻射、熱暴露、紫外線、缺氧等)下,ROS水平急劇升高,可能造成DNA損傷、抑制基因表現、導致蛋白質錯誤折疊甚至影響蛋白質合成,對細胞結構造成嚴重破壞,這就是所謂的氧化壓力。
一旦 ROS 水平超過內源性抗氧化防禦的能力,氧化還原平衡就會被破壞,導致 DNA、脂質、蛋白質的結構或構象變化,最終導致細胞死亡。
ROS水平是細胞因正常生理功能和環境因素造成損傷的重要信號,檢測細胞內ROS水平對於了解一些藥物的信號通路和潛在作用機制具有重要意義。因此,選擇合適的探針檢測ROS對疾病機制研究和藥物篩選具有重要的意義。
ROS 檢測如何進行?
這 活性氧檢測試劑盒 (CAT# 50101ES01) 是基於螢光染料 DCFH-DA(2,7-二氯二氫螢光素二乙酸酯)的螢光強度變化來量化細胞內活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身無螢光,可自由穿過細胞膜,進入細胞後被細胞內的酯酶水解生成DCFH。然而,DCFH無法穿透細胞膜,使得探針很容易在細胞內被標記和聚集。細胞內的活性氧能夠氧化非螢光的DCFH,形成螢光的DCF。 DCF綠色螢光的強度與細胞內活性氧水平成正比,透過檢測DCF的螢光即可了解細胞內活性氧水平。
在激發波長488nm、發射波長525nm的條件下,利用螢光顯微鏡、雷射共聚焦顯微鏡、螢光分光光度計、螢光酶標儀、流式細胞儀等檢測DCF螢光,從而測定細胞內活性氧含量。
使用此產品的客戶發表的文獻(部分範例)
截止2022年9月,ROS活性氧檢測試劑盒(50101ES01)共發表文章164篇,總影響因子913.72。





ROS產生對巨噬細胞極化及腫瘤細胞殺傷的影響(PMID: 35665496; PMID:35301299; PMCID:PMC8931093PMCID:PMC9353410。

常問問題
Q1:哪些樣品適合做ROS測試?
A1:一般用於哺乳類細胞的檢測,只適合活細胞或活體動物體內活性氧的檢測。
問題2:ROS檢測試劑盒適合檢測血清還是血漿?
A2:不適合檢測血清或組織勻漿中的ROS。可以嘗試新鮮組織製備的單細胞懸浮液。
Q3:可以檢測植物或細菌嗎?
A3:只適合活細胞或生物體內活性氧的檢測,因為氧的羥基自由基和超氧自由基的半衰期很短,只適合活細胞的檢測。植物或細菌,製備原生質體後才可用於檢測,本試劑盒無法檢測體內的ROS。
Q4:如何避免過多的螢光背景?
A4:探針孵育後,務必洗掉任何未進入細胞的剩餘探針。
Q5:我可以檢測正常細胞中的ROS含量嗎?
A5:正常細胞內活性氧的含量很低,檢測效果可能不是很好。
Q6:陰性和陽性螢光值相同,這是怎麼回事?
A6:可能是添加的探針濃度太大導致的,建議降低探針濃度5-7.5μM,孵育時間:15-20分鐘。
Q7:陽性對照的螢光很弱,這是怎麼回事?
A7:陽性對照Rosup通常濃度為100μM,刺激後30分鐘至4小時可觀察到活性氧顯著增加。活性氧陽性對照的效果在不同細胞之間可能存在很大差異。若刺激後30分鐘內未觀察到ROS的增加,則可適當延長誘導時間或增加Rosup的濃度。
A8:同一個探頭,不分次,前5次效果很好,這次卻不染色,這是怎麼回事?
Q8:1、細胞狀態不好,導致染色效率低; 2.陽性藥物誘導時間過短,37℃避光孵育30min-4h即可明顯升高活性氧水平; 3.探針經4次以上凍融,染色效率降低,螢光訊號不穩定(時強時弱,易猝滅)。建議將探針分裝並儲存在-20°C 冰箱中,避免光照,以避免反覆的凍融循環。
Q9:可以使用哪些儀器來測試?
A9: 螢光顯微鏡、雷射共聚焦顯微鏡、螢光分光光度計、螢光酶標儀、流式細胞儀等都可以偵測螢光值。
客戶使用該產品發表的科研成果(部分)
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產品名稱 | 目錄編號 | 尺寸 |
50101ES01 | 1 套試劑盒(1000 次測試) |