1. 如何防止RNA降解？

2. 什麼是RNase抑制劑？

3. RNase抑制劑有什麼作用？

4. 鼠 RNase 抑制劑有哪些特性？

5. 相關產品及業績

6. 相關產品

7. 常見問題

1. 如何防止RNA降解？

RNase在核酸代謝中起著重要作用，幾乎存在於任何類型的原核生物和真核生物中。淚液、唾液、汗水等體液中會分泌RNase，以防禦微生物的入侵，皮膚碎屑中也存在RNase。然而大多數環境中RNase的主要來源是微生物，即細菌、真菌。 RNase極難失活，且穩定性高，具有耐熱、耐酸、耐鹼性。熱變性後能很快恢復原有結構。 RNase通常非常活躍，廣泛分佈於真核生物和原核生物的細胞和組織中。樣本中的RNA只需極少量的RNase污染就能完全降解。研究中 RNase 污染可能來自內部和外部來源。細胞中的RNase主要是內源性污染源，外源性污染源包括實驗用品、實驗室環境、以及實驗者本身。 RNases，尤其是 RNase A 家族的成員，是小而緊湊的蛋白質，含有一些半胱氨酸殘基，能夠形成許多分子內二硫鍵。恢復至室溫後，在沒有變性劑的情況下，變性的RNase會恢復其天然結構和部分功能。因此，經過反覆的凍融循環，甚至高壓滅菌後，RNases 仍然保留相當高的活性。這些酶的穩定性使得它們能夠抵抗許多淨化方法，這些方法通常需要採取激進的化學方法來消除表面和溶液中的 RNases。

為了避免脆弱的 RNA 降解，處理 RNA 時必須採取特別預防措施。為了控制外源性RNase，操作者在實驗過程中需戴手套，並在接觸皮膚、門把手、普通物品表面後更換手套。且操作者需使用專門針對RNA操作的移液槍，並使用RNase-free的壁吸頭、離心管、化合物、試劑。遠離或遮住通風孔和打開的窗戶，並使用人跡罕至的區域作為無 RNase 區域。並且在RNA萃取和分析過程中，請勿進行其他可能導致RNase污染的實驗。
抑制內源性RNase活性的方法首先是保存樣本。組織取樣後，不應直接萃取 RNA。而應及時用液態氮迅速凍存於-80℃環境中，並儘快進行實驗，以最大程度減少RNA的降解。在細胞裂解液中添加RNase抑制劑，同時破碎細胞並滅活RNase，最大限度地降低細胞破碎過程中釋放的RNase活性。 所有試劑和設備在使用前都必須經過特殊處理以滅活 RNases。

此外，可以使用RNA抑制劑來抑制RNase活性，防止RNase降解RNA。 RNA 抑制劑有以下幾種類型：

• 二乙基焦碳酸(DEPC)：它是一種強效但不完全的RNase抑制劑。它透過與RNase活性基因組中的組胺酸的咪唑環結合，使蛋白質變性，從而抑制酵素的活性。
• 異硫氰酸胍：目前被認為是最有效的RNase抑制劑，它在裂解組織的同時，也能使RNase失活，能破壞細胞結構，使核酸與核蛋白解離，同時對RNase也有一定的變性作用。
• 釩核糖核苷複合物：釩氧離子與核苷形成的複合物，能與RNase結合形成過渡類似物，幾乎完全抑制RNase的活性。
• RNase蛋白抑制劑（RNasin）：RNasin是從大鼠肝臟或人類胚盤中提取的一種酸性糖蛋白，是一種非競爭性的RNase抑制劑，能與多種RNase結合，使其失去活性。
• 其他：SDS、尿素、矽藻土等對RNase也有一定的抑製作用。

2. 什麼是RNase抑制劑？

RNase抑制劑是一類能夠抑制RNase活性的物質。常見的RNase抑制劑包括二乙基焦碳酸PC（DEPC）、異硫氰酸胍、核糖核苷釩複合物（RVC）、RNase蛋白抑制劑（RNasin）。其中DEPC和異硫氰酸胍具有一定的毒性，RVC對PCR聚合酶有抑製作用，不利於後續實驗。 RNasin無毒，是一種非競爭性的RNase抑制劑，能與多種RNase結合，使其失去活性。

3. RNase抑制劑有什麼作用？

RNase抑制劑通常用作RNA酶操作中的預防措施，以抑制和控制此類污染物。 RNasin是從大鼠肝臟或人類胚盤中提取的一種酸性糖蛋白，它可以非共價方式與RNase特異性結合，形成複合物，導致RNase失活，從而保護RNA的完整性。目前，RNase抑制劑有助於防止cDNA合成、RT-PCR、體外轉錄/翻譯反應或RNA純化等應用中的RNA降解。

4. 鼠 RNase 抑制劑有哪些特性？

重組鼠RNase抑制劑不含有人源RNase抑制劑中所含的2個氧化敏感的半胱胺酸。因此，鼠RNase抑制劑具有較高的抗氧化活性，且對於低DTT實驗更為穩定。此外，鼠 RNase 抑制劑 Yeasen 具有以下特點：
1）全方位RNase抑制：鼠RNase抑制劑 Yeasen 特異性抑制RNase A、RNase B、RNase C等。
2）反應條件多樣：RNase抑制劑在pH 5.0-9.0、25℃-55℃下有活性，適用於耐熱逆轉錄酶。
3) 可進行多個下游實驗：當 RNase 抑制劑與 Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MuLV 逆轉錄酶或噬菌體 RNA 聚合酶（SP6、T7 或 T3）一起使用時，未觀察到聚合酶活性的抑制。
4）量產商品：單筆製造能力20億U，確保產品同質化、供應穩定性、時效性，有利成本管理。
5）批次間一致性：成熟的蛋白質表現及純化平台，透過ISO13485品質管理體系，依品質需求進行品管檢測，確保產品批次間穩定性。

5. 相關產品及業績

A. RNase抑制劑阻斷RNase活性

1μg HEK細胞總RNA，1μL RNase抑制劑可有效抑制5ng RNase。

圖1. 鼠RNase抑制劑的抑制效果。

B. RNase Inhibitor在qPCR檢測中超越國外產品

抑製作用 Yeasen 在相同的實驗環境下，採用 qPCR 技術測定了 R* Company 小鼠來源的 RNase 抑制劑 (MRI) 的含量，其中 RNase 抑制劑 Yeasen 鼠源有效抑制了系統中的RNase A。抑制的效果優於競爭對手。

圖 2. R* MRI RNase 抑制試驗

註：圖中曲線由左至右分別為：陽性對照（僅RNA，無RNase和MRI）、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、和陰性對照（RNA+RNase，無MRI）。

圖 3. Yeasen MRI RNase 抑制試驗

註：圖中曲線由左至右分別為：陽性對照（僅RNA，無RNase和MRI）、80 U MRI、60 U MRI、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、陰性對照（RNA+RNase，無MRI）。

圖 4. RT-qPCR 結果的 CT Yeasen MRI 和 R* MRI

6. 相關產品

相關產品 Yeasen 可以提供如表1所示：

表 1.產品列表

7. 常見問題

Q1：Murine RNase抑制劑裡會有RNase嗎？
答：每個試劑都會檢測RNase活性，確保Murine RNase抑制劑不會帶來RNase污染。
Q2：鼠RNase抑制劑會對下游PCR實驗產生影響嗎？
答：不會有什麼影響。每批鼠 RNase 抑制劑經過品質檢測均無基因組污染，可用於 RT-PCR 和 RT-qPCR 研究。
Q3：Murine RNase抑制劑會失去活性嗎？
答：抑制劑在65°C以上會失活，劇烈攪拌也會導致失活。
Q4: 使用Murine RNase抑制劑配製反應系統時應注意事項為何？
答：在製備體系時，可以先加入RNase抑制劑，再加入其他可能引入RNase污染源的成分。
Q5：鼠 RNase 抑制劑是否具有內切酶和外切酶活性？
答：不具有內切酶和外切酶活性，有助於提高產品產量。

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