RNase HII，也稱為 RNase H2，是一種內切核糖核酸酶，可特異性地靶向並切斷雙股 DNA 螺旋內單一核糖核苷酸 5' 端的磷酸二酯鍵，產生 5' 磷酸和 3' 羥基（圖 1）。此酵素對單股 RNA 表現出最小的切割活性，且對雙股 DNA（dsDNA）和單股 DNA（ssDNA）均無活性。 RNase HII 在 50°C 至 75°C 的溫度範圍內保持功能活性，並在 70°C 至 75°C 之間的溫度下達到峰值性能。 RNase HII 利用其獨特的能力，在核苷酸整合的 DNA 位點進行有針對性的單點切割，而不影響 dsDNA 或 ssDNA，可作為反應啟動（包括引子激活和延伸）的精確“觸發器”，實現特定的擴增。該酵素在RNase H依賴性PCR（rhPCR）、環介導等溫擴增（LAMP）技術和岡崎片段中RNA成分的降解中起著關鍵作用。

一. RNase H依賴性PCR（重組人PCR）
rhPCR 將 RNase HII 和專門設計的封閉式可裂解 rhPCR 引子納入 PCR 過程。此方法利用 RNase HII 的獨特特性來選擇性地水解 DNA-RNA 雜交體中的 RNA，同時保持單鍊或雙股 DNA 和 RNA 中的磷酸二酯鍵完好無損。因此，RNase HII 僅消化 DNA-RNA 雜交體，且當引子與目標 DNA 序列完全互補時允許引子延伸。這種有針對性的行動大大提高了反應的準確性。 RNase HII 是唯一能夠透過在核糖核酸的 5' 端進行切割來啟動核糖核苷酸的精確去除，而不會誘發突變的酵素。 rhPCR因其高特異性、靈敏度和可重複性，在單核苷酸多態性（SNP）檢測、基因分型、多目標同時檢測、環境核酸分析等應用中具有明顯的優勢。

技術路線

1. 引子設計

引子設計必須確保切割後的熔化溫度高於退火溫度，以確保引子在PCR循環過程中穩定地與模板結合。 rhPCR引子由三個部分組成：

1）5'DNA片段：長度和解鏈溫度（Tm）要求與標準PCR引子相當，經RNase HII酶切割後能有效與模板DNA配對並從模板DNA上延伸。

2）單一RNA鹼基：為RNase HII提供切割位點。

3）3' DNA片段：長度為4或5個鹼基的片段，帶有阻斷劑，通常是一種較短的、不可延伸的分子，如丙二醇，它可以阻止DNA聚合酶的延伸，直到阻斷劑被去除。

2.切割和延伸

在 rhPCR 反應開始時，引子和模板 DNA 是自由的。當引子與特定的RNA：DNA異質雙股模板結合時，被阻斷引子的RNA鹼基5'側被RNase HII酶識別並切割，留下帶有3'-羥基的DNA寡核苷酸，為DNA聚合酶延伸提供起點。接下來是常規的 PCR 擴增過程。

圖2. rhPCR原理圖 ^[1]

二.環介導等溫擴增（LAMP）

環介導等溫擴增（LAMP）是一種簡單、快速的基因擴增方法，可在短時間內以等溫條件擴增核酸。但由於室溫製備過程中DNA聚合酶活性的啟動，會形成非特異性錯配，進而導致少量錯配和引子二聚體，造成輕微污染，可能導致假陽性。
將RNase HII應用於LAMP擴增體系，可以有效解決LAMP技術中的假陽性問題，拓展在臨床診斷上的應用。如圖3所示，採用RNase HII的引子活化LAMP方法（PA-LAMP），當引子與目標ssDNA配對時，RNase HII酶特異性地裂解引子上的RNA，使其活化並允許引子延伸，實現特異性擴增並有效降低系統中的假陽性。

Yeasen 核糖核酸酶Ⅱ

Yeasen核糖核酸酶 HII （貓號#14539） 源自 深淵火球藻，且不含污染性核酸酶、切口酶及RNase殘留物，宿主DNA污染低，有效降低系統中的假陽性。 Yeasen的RNase HII具有極強的耐熱性，在95°C下30分鐘後仍能維持活性，與各種rhPCR反應體系相容，也適用於LAMP等應用。

1.大腸桿菌 基因組 DNA 殘留量 < 0.5 拷貝/100 U

偵測 大腸桿菌 不同批次RNase HII中基因組DNA殘基的比較結果表明，宿主基因組DNA殘基 Yeasen的 RNase HII 遠低於 0.5 拷貝/100 U。

圖 4. 檢測 大腸桿菌 基因組 DNA 殘基

2. 95℃耐熱試驗

將RNase HII在95°C加熱0至45分鐘後，測試RNase HII的酵素活性。結果表明，酶活性幾乎沒有損失。 Yeasen即使加熱 45 分鐘後，RNase HII 也不會受到影響。

圖5. 95℃耐熱試驗

3. 無外切酶、切口酶或 RNase 殘留物（1 U 劑量）

將1U不同批次的RNase HII與各自的底物DNA/RNA在37°C孵育4小時，瓊脂糖凝膠電泳結果顯示RNase HII中無外切酶、切口酶及RNase殘留。

圖 6.外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果

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產品應用	產品名稱	目錄編號
重組人PCR、LAMP	RNase HII(2 U/μL) RNase HII，無甘油（2 U/μL）	14539ES 14541ES
重組人PCR	Hieff® Taq DNA 聚合酶	10101ES
RT-LAMP	希夫 Bst Plus DNA 聚合酶（40 U/μL）	14402ES
	Hifair® Ⅲ逆轉錄酶	11111ES

參考

[1] Dobosy JR、Rose SD、Beltz KR、Rupp SM、Powers KM、Behlke MA、Walder JA。 RNase H依賴性PCR（rhPCR）：使用阻斷的可裂解引子提高特異性和單核苷酸多態性檢測。 BMC 生物技術。 2011年8月10日；11:80。 doi: 10.1186/1472-6750-11-80。

[2] 杜偉鋒, 葛建華, 李建軍, 等.引子活化環介導等溫擴增(PA-LAMP)技術單步高特異性檢測單核苷酸突變[J].分析化學學報, 2019(1050-):1050.DOI:10.1016/j.aca.2018.