T7 高產量 RNA 合成試劑盒－用於研究的高效 RNA 合成
T7 高產量 RNA 合成試劑盒 優化轉錄反應體系。本試劑盒利用T7 RNA聚合酶，以含有T7啟動子序列的線性雙股DNA為模板，以NTPs為底物控制啟動子下游的DNA序列，高效合成單股RNA。在轉錄過程中，可以將修飾的核苷酸添加到底物中以製備生物素或染料標記的 RNA。
1. T7高產量RNA合成試劑盒介紹
2. 原則 體外 轉錄
3. 優點
4.產品性能
5. 如何使用本套件
6. 常見問題
7. 訂購信息
1. T7高產量RNA合成試劑盒介紹
T7高產量RNA合成試劑盒可以合成長轉錄本，也可以合成短轉錄本，每輸入1 μg DNA模板就可以產生100-200 μg RNA。合成的RNA可用於各種下游應用，例如RNA結構和功能研究，RNase保護，探針雜交，RNA幹擾，顯微注射等 體外 翻譯。
2. 原則 體外 轉錄
圖 1. 體外 轉錄過程
3. 優點 Yeasen T7 高產量 RNA 合成試劑盒
產量極高－2 小時內產量高達 200 µg
多功能－適用於20nt-10000nt RNA轉錄本
多種用途－產生未標記、標記或加帽的 RNA
4.產品性能
圖 2. IVT 良率比較
註：所有反應試劑均來自 T7 RNA 合成試劑盒 （
圖3. 不同長度的轉錄產物質量
圖4. HEK-293細胞中轉錄mRNA表現水平
注意：mRNA 被痘苗加帽酶加帽（
5. 如何使用本套件
5.1 解凍試劑
將 T7 RNA 聚合酶混合物短暫離心並置於冰上。解凍10×轉錄緩衝液和核糖核苷酸（ATP、CTP、GTP、UTP），混合並離心至管底，將10×轉錄緩衝液放在室溫下，將四種核糖核苷酸放在冰上。
5.2 按下表配製轉錄反應體系
表 1.轉錄反應體系的製備方法
| 成分 | 容量（μL） | 最終濃度 |
| 無 RNase H2哦 | 最多 20 | - |
| 10×轉錄緩衝液 | 2 | 1× |
| CTP / GTP / ATP / UTP (各 100 mM) | 各 2 個 | 每個 10 毫米 |
| 模板DNA | 1 微克 | - |
| T7 RNA 聚合酶混合物 | 2 | - |
筆記：
a) 反應在室溫下進行。由於10×Transcription Buffer中含有亞精胺，低溫下亞精胺濃度過高將導致DNA模板沉澱。
b) 短轉錄本（<100 nt），可使用2 µg 模板，轉錄時間增加至4-8 小時。
c) 對於長轉錄物（>1000 nt），建議使用線性化的質粒模板進行轉錄。
d) PCR儀中反應應在熱蓋打開的狀態下進行，以防止反應液長時間蒸發。
e)反應產物可能有白色沉澱。這是遊離的焦磷酸鹽與鎂離子在反應過程中產生的焦磷酸鎂，不會影響後續實驗。您可以添加 EDTA 來將其去除。如果擔心添加EDTA影響後續實驗，也可以透過離心回收上清液。
f) 試劑和容器不得受RNase污染。
5.3 37°C 孵育 2 小時
混勻上述反應液，短暫離心至管底，37°C 孵育 2 h。如果轉錄本長度小於 100 nt，則將反應時間增加至 4-8 小時。
5.4 DNase I 處理（可選）
反應完成後，每管加入2 μL DNase I（無RNase），37°C 孵育15分鐘，以去除模板DNA。
6. 常見問題
6.1 IVT反應產率低
模板品質與產量密切相關。如果實驗組的產量明顯低於陽性對照組，則可能的原因如下。
① 模板中含有抑制IVT反應的成分。
② 模板有問題。
6.2 建議
①重新淨化模板。
②確認模板的濃度和完整性。
③延長反應時間。
④增加模板的輸入。
⑤嘗試其他RNA聚合酶和對應的啟動子。
6.3 短轉錄本產量低
若目標轉錄物短於100nt，可延長反應時間為4-8小時或增加模板輸入量至20μL反應系統中的2ug。
6.4 有意外的較長的轉錄本
如果凝膠電泳結果顯示有意外的較長的轉錄本，則可能的原因是：
① 質粒模板可能未完全線性化。
②模板具有 3' 突出端的黏性末端。
③轉錄本具有未完全變性的二級結構。
6.5 建議
①檢查質粒模板是否完全線性化。如果有必要，再次進行質粒線性化。
②選擇合適的限制性內切酶使質粒模板線性化，避免產生帶有3'突出端的黏性末端。如果有必要的話，可以使用Klenow片段或T4 DNA聚合酶來產生平末端。
③利用變性凝膠檢測轉錄物。
6.6 有意外的較短抄本
如果凝膠電泳結果顯示有意外的較短的轉錄本，則可能的原因是：
①模板中存在與T7 RNA聚合酶終止序列類似的序列。
②模板GC含量高。
6.7 建議
①降低反應溫度（例如30℃），但注意有時降低反應溫度會降低產率。
②嘗試其他RNA聚合酶催化IVT反應。
③如果模板GC含量較高，可將IVT反應溫度設定為42℃或在IVT反應體系中添加SSB，以提高產量和轉錄本的長度。
6.8 凝膠電泳過程中轉錄本出現拖尾
如果在凝膠電泳過程中出現轉錄本的拖尾現象，可能的原因有：
①實驗操作過程中有RNase污染。
②DNA模板被RNases污染。
6.9 建議
①確保所有試劑均以無RNase的H2O配製。實驗操作時請使用無RNase的移液管吸頭和Eppendorf管，戴上一次性乳膠手套和口罩。
②重新純化DNA模板。
7. 訂購信息
以下是
我們還可以提供客製化服務。如果您對未顯示的產品感興趣，請聯絡我們，我們將與您合作，滿足您的需求。
表 2.產品資訊
| 產品名稱 | 庫存單位 | 規格 |
| CleaScrip™ T7 RNA 聚合酶（低 ds RNA，250 U/μL） | 10628ES | 10/100 庫拉索 |
| T7 高產量 RNA 合成試劑盒 | 10623ES | 50/100/500 噸 |
| T7 RNA 聚合酶 GMP 級（50 U/μL） | 10624ES | 5000/50000 美國 |
| T7 RNA聚合酶GMP級（250 U/μL) | 10625ES | 10/100 庫拉索 |
| 10×轉錄緩衝液2 GMP級 | 10670ES | 1/10毫升 |
| 無機焦磷酸酶，GMP級 0.1單位/μL) | 10672ES | 10/100/1000U |
| 小鼠 RNase 抑制劑 GMP 級 | 10621ES | 10/20/100 庫 |
| BspQI GMP級 | 10664ES | 500/2500 單位 |
| 脫氧核糖核酸酶 GMP級 | 10611ES | 500/2000/10000 美國 |
| mRNA痘苗加帽酶GMP級 | 10614ES | 2000/10000/100000 美國 |
| mRNA Cap 2'-O-甲基轉移酶 GMP 級 | 10612ES | 2000/10000/50000 美國 |
| 10×封蓋緩衝液 GMP級 | 10666ES | 1/10毫升 |
| S-腺苷甲硫胺酸（SAM）（32 mM） | 10619ES | 0.5/25/500 毫升 |
| 假尿苷-5-三磷酸，三鈉鹽溶液（100 mM） | 10650ES | 20 μL/100 μL/1 毫升 |
| N1-Me-Pseudo UTP 鈉溶液(100 mM) | 10651ES | 20 μL/100 μL/1 毫升 |
| ATP溶液（100 mM） | 10129ES | 1/25/500 毫升 |
| CTP溶液(100mM) | 10130ES | 1/25/500 毫升 |
| UTP溶液(100mM) | 10131ES | 1/25/500 毫升 |
| GTP 溶液(100 mM) | 10132ES | 1/25/500 毫升 |
| NTP套裝溶液（ATP、CTP、UTP、GTP各100mM） | 10133ES | 1 套（4 瓶） |
| Hieff NGS™ RNA 清潔劑 | 12602ES | 1/5/60/450 毫升 |
| ATP Tris 溶液 GMP 級 (100 mM) | 10652ES | 1/5/25/500 毫升 |
| CTP Tris 溶液 GMP 級 (100 mM) | 10653ES | 1/5/25/500 毫升 |
| GTP Tris 溶液 GMP 級 (100 mM) | 10655ES | 1/5/25/500 毫升 |
| 偽 UTP Tris 溶液 GMP 級（100 mM） | 10656ES | 1/5/25/500 毫升 |
| N1-Me-Pseudo UTP Tris 溶液 GMP 等級（100 mM） | 10657ES | 1/5/25/500 毫升 |
| ARCA（防反接電容模擬） | 10681ES | 1/5/25/500 毫升 |
| 雙股 RNA（dsRNA）ELISA 試劑盒 | 36717ES | 48噸/96噸 |
關於閱讀：
用於 mRNA 體外合成的 GMP 級試劑