Qubit,多麼強大的NGS文庫定量工具啊!
NGS文庫定量的本質是核酸(DNA或RNA)定量。準確分析NGS文庫定量對於獲得高品質的定序資料至關重要。如果NGS文庫的定量濃度較高,由於聚類不充分,則定序資料的產量可能較低。然而,較低的定量濃度可能造成簇間訊號幹擾,產生低品質的數據,甚至導致定序失敗。另外,隨著定序儀定序通量的增加,也經常需要多個NGS文庫聯合進行定序。根據定序資料大小的要求,在定量結果的基礎上混合相應摩爾數量的NGS文庫,以穩定每個樣本資料大小的輸出。因此,準確的NGS文庫量化至關重要。
目前NGS文庫定量方法主要有兩種:紫外線吸收法、螢光染料法。 NanoDrop是基於紫外線吸收原理設計的DNA定量儀器; Qubit是根據螢光染料的原理所發展出來的DNA定量儀器。兩種方法的定量精度和成本有所不同。這裡主要推薦量子比特方法。那我們為什麼向您推薦量子位元呢? Qubit 提供的產品有哪些特點
1.我們為什麼向您推薦Qubit?
2. Qubit 提供的產品有哪些特點
- Qubit 如何運作?
- 熱門商品由
Yeasen - 產品特性
3. 針對不同的樣本,如何選擇Qubit?
1.我們為什麼向您推薦Qubit?
毫無疑問,Qubit 比 Nanodrop 更好。那為什麼 qubit 比 nanodrop 更好呢? qubit 和 nanodrop 有什麼不同?首先,如之前所說,它們的DNA定量原理不同,NanoDrop是基於紫外線吸收設計的。紫外線吸收法的原理是,核酸成分中含有嘌呤、嘧啶鹼基,這些鹼基具有共軛雙鍵。在紫外線區250~280nm處有強烈的光吸收,最大吸收值在260nm左右。因此,可以利用核酸的紫外線吸收來進行濃度定量。 NanoDrop操作簡單、快捷,但無法區分DNA、RNA、降解的核酸、遊離核苷酸和其他雜質。它不適合獲取準確的圖書館定量數據。但對於精確的NGS文庫定量,尤其是DNA定量,Qubit定量是最佳選擇。那麼量子比特DNA量化有什麼特性呢?請查看下表:
特異性 | 螢光染料優先結合雙股 DNA |
DNA片段長度 | 無具體限制 |
準確性 | 高的 |
樣本量要求 | 稀釋1-20μl樣品 |
檢測濃度範圍 | 0.2-100ng |
標準數量 | 通常兩個 |
試驗手動操作時間 | 設定時間為5分鐘,單一樣品測量時間為3秒 |
檢測時間 | 5分鐘-30分鐘(取決於樣本大小) |
適用儀器 | 量子位元(3.0/4.0);具有相應波長的微孔板讀數儀 |
適用場景 | 雙股DNA定量; NGS 文庫建構中的 dsDNA 定量和常規文庫中的快速定量 |
2. Qubit 提供的產品有哪些特點 Yeasen ?
在介紹Qubit產品的特點之前
2.1 Qubit 如何運作?
Qubit的原理是利用螢光染料與DNA分子結合發出螢光,然後測量螢光強度來獲得核酸的濃度。螢光染料只有與DNA雙股結合後才會發出螢光,產生的螢光與DNA濃度成正比。
2.2 熱門商品由 Yeasen
這 1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®(貨號:12642ES),以 Qubit® 試劑盒的 dsDNA HS 檢測試劑盒(貨號:12640ES)是一種即用型 Qubit 預混溶液,用於將原始試劑盒中的濃縮染料預先稀釋成工作溶液。操作時,只需將工作液與待測樣本混合,即可透過Qubit®螢光儀測定樣本濃度,使用更方便。
2.3 產品特點
簡單易操作:即取即用的預混液,無需配製工作液,操作簡單、定量更省時;
圖 1. Qubit dsDNA HS 檢測試劑盒流程
超高靈敏度:64倍梯度稀釋精確定量,0.2-100 ng dsDNA具有良好的線性關係;
超強特異性:特異性檢測dsDNA,對一些常規污染物有極佳的耐受性;
染料結合速度快:2分鐘內即可達到飽和,無需等待即可快速讀取準確的定量結果;
穩定性高:螢光訊號可持續3h,室溫放置20天後定量準確度不受影響。
圖1.產品穩定性測試。結果表明 室溫放置2週後穩定(測量值與理論值偏差<10%)
註:選取兩種濃度的dsDNA,Thermo#Q33230 4℃保存,
圖2.產品穩定性測試。超強穩定性,有效期限內偵測結果相關性高
3. 針對不同的樣本,如何選擇Qubit?
量子比特,快速量化!使用Qubit進行文庫定量有很多優點。其檢測過程快速、有效。單一樣本幾秒鐘內就能得到定序結果並直接輸出濃度,非常直覺。同時也可相容於大部分酶標儀進行批量樣本定量,是常規文庫定量、dsDNA定量的首選。
產品名稱 | 目錄編號 | 尺寸 | 應用 |
1×dsDNA HS 檢測試劑盒(適用於 Qubit) | 12642ES | 100噸/500噸 | 雙股DNA定量 文庫定量 |
Qubit 的 dsDNA HS 檢測試劑盒 | 12640ES | 100噸/500噸 | |
單股DNA檢測試劑盒 | 12645ES | 100噸/500噸 | 單股DNA定量 文庫定量 |