核酸定量作為分子生物學中最基本的實驗之一，直接影響下游實驗的結果。核酸定量的準確性至關重要。目前NGS文庫定量方法主要有兩種：紫外線吸收法、螢光染料法。
紫外線吸收法是利用分光光度計測定260nm處的吸光度對DNA和RNA進行定量。它還透過計算 OD260/OD280 比率來估計核酸的純度。然而，檢測值很容易受到遊離核苷酸、鹽和有機化合物等其他污染物的干擾。
Qubit 螢光定量利用特異性結合雙股 DNA、單股 DNA、RNA 或蛋白質的螢光染料。在特定波長的光源激發下，染料會發出螢光，不會受到樣本中可能存在的其他雜質分子的影響。螢光強度與樣本中目標分子的濃度成正比。
表1. 主流核酸定量方法比較
| 目標 | 紫外線吸收 (奈米滴) | Qubit DNA HS | 量子位 DNA BR | 量子位 RNA | 量子比特 ssDNA |
| 核酸類型 | 脫氧核糖核酸、核糖核酸 | 雙股DNA | 雙股DNA | 核糖核酸 | 單股DNA、寡核苷酸 |
| 樣本濃度（ng/μL） | 2奈克/微升至15微克/微升 | 10 皮克/微升 - 100 奈克/微升 | 0.1 奈克/微升 - 1000 奈克/微升 | 250 皮克/微升-1000 納克/微升 | 50 皮克/微升 - 200 奈克/微升 |
| 優勢 | 更高的定量極限 | 特異性好 | 定量範圍廣 | 對 RNA 具有高度選擇性 | 耐受性良好 |
| 限制 | 特異性差 | 使用時避光保存 | 使用時避光保存 | 使用時避光保存 | 特異性較差，且能結合 dsDNA |
紫外吸光度和Qubit螢光定量各有優勢，可以互相補充。對於常規核酸樣本的初步定量，以確定濃度、純度和污染物的存在，可以選擇吸光度定量方法。 量子定量更適合低濃度的珍貴樣本，或下游實驗所需的精準定量，例如二代定序、即時定量PCR等。
解 1 dsDNA HS 高靈敏度定量
即用型 dsDNA 定量預混液—1× dsDNA HS 檢測試劑盒（適用於 Qubit）®
操作簡單：即用型預混料，無需預先混合；
靈敏度高：可偵測濃度低至50 pg/μL；
穩定性佳：螢光訊號可持續3小時，室溫保存20天不影響定量的準確度；
A.穩定性極佳：室溫儲存2週仍維持穩定性（測量值與理論值偏差在10％以內）。
表 2. 不同樣品在 4°C 和室溫下的穩定性測試與競爭對手的比較
| 定量試劑 | 決定 專注 λDNA含量（ng/μL） | ||||||||||
| 0天 | 1天 | 3D | 7d | 10d | 14d | ||||||
| T* 4℃ | 0.51 | 0.496 | 0.524 | 0.534 | 0.495 | 0.499 | |||||
| | 0.51 | 0.508 | 0.513 | 0.475 | 0.48 | 0.495 | |||||
| | 0.51 | 0.517 | 0.506 | 0.486 | 0.506 | 0.523 | |||||
| 定量試劑 | 決定 專注 小牛gDNA（ng/μL） | ||||||||||
| 0天 | 1天 | 3D | 7d | 10d | 14d | ||||||
| T* 4℃ | 55.3 | 53.5 | 55.40 | 57.9 | 55.8 | 58 | |||||
| | 59.4 | 55.4 | 57.8 | 56.1 | 56.3 | 59.8 | |||||
| | 59 | 55.7 | 61.3 | 58 | 58.7 | 56.1 | |||||
B.靈敏度高，批次間穩定性好
表 3.不同批次穩定性試驗
| 乙追擊 | 樣本 | 長* | | 錯誤 | ||||
| 濃度1（ng/μL） | 濃度2（ng/μL） | 平均值（ng/μL） | 濃度1（ng/μL） | 濃度2（ng/μL） | 平均值（ng/μL） | |||
| D9801060 | λDNA | 0.3160 | 0.3250 | 0.3205 | 0.320 | 0.320 | 0.320 | 0.16% |
| D8801050 | 0.3310 | 0.3320 | 0.3315 | 0.319 | 0.306 | 0.3125 | 5.73% | |
| D7813110 | 0.345 | 0.358 | 0.352 | 0.334 | 0.329 | 0.332 | -6.03% | |
解 2 dsDNA BR 寬範圍定量
廣泛範圍的 dsDNA 定量分析—dsDNA BR 檢測試劑盒
靈敏度高：可偵測濃度低至50 pg/μL；
線性好：2-1000ng範圍內線性良好；
對污染物耐受力強：能耐受常見的污染物。
表 4. 與競爭產品相比的穩定性和對污染物的耐受性
| | T* 巴西雷亞爾 | ||||||||||
| 標準 | RFU1 | 射頻功率放大器 | 平均 | 錯誤 | 標準 | RFU1 | 射頻功率放大器 | 平均 | 錯誤 | ||
| S1 | 159.63 | 160.71 | 160.17 | 1% | S1 | 216.17 | 211.56 | 213.865 | -2％ | ||
| S2 | 24497.0 | 25078.64 | 24787.82 | 2% | S2 | 20532.46 | 20452.26 | 20492.三十六 | 0％ | ||
| 測定 |
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| 測定 |
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| 污染物 | 10 μL 樣品中的濃度 | 濃度1 | 濃度2 | 平均 | 待測試/控制 | 污染物 | 10 μL 樣品中的濃度 | 濃度1 | 濃度2 | 平均 | 待測試/控制 |
| 控制（H2哦） | / | 49 | 48.6 | 48.8 | 0.0% | 控制（H2哦） | / | 49.8 | 四十八 | 48.9 | 0.0% |
| 牛血清白蛋白 | 1毫克/毫升 | 51.8 | 52 | 51.9 | 6.4% | 牛血清白蛋白 | 1毫克/毫升 | 54 | 51.2 | 52.6 | 7.6% |
| 乙醇 | 20％ | 44.6 | 四十四 | 44.3 | -9.2％ | 乙醇 | 20％ | 44.8 | 43.4 | 44.1 | -9.8％ |
| 氯仿 | 4.00％ | 49.0 | 49.8 | 49.4 | 1.2％ | 氯仿 | 4.00％ | 50.0 | 四十七 | 48.5 | -0.8％ |
| 十二烷基硫酸鈉 | 0.2% | 46.6 | 45.8 | 46.2 | -5.3％ | 十二烷基硫酸鈉 | 0.2% | 53.2 | 51.6 | 52.4 | 7.2% |
| Trition-X100 | 0.20% | 41.6 | 40.6 | 41.1 | -15.8％ | Trition-X100 | 0.20％ | 53 | 51 | 52.0 | 6.3% |
| 脫氧核糖核苷酸 | 2毫米 | 44.2 | 四十五 | 44.6 | -8.6％ | 脫氧核糖核苷酸 | 2毫米 | 47.8 | 46.4 | 47.1 | -3.7％ |
解決方案 3 ssDNA 定量
ssDNA定量分析的理想選擇—Qubit高性價比ssDNA檢測試劑盒®
靈敏度高：可偵測濃度低至50 pg/μL；線性優良：0-200ng範圍內線性良好；
訊號穩定：優異的染料與升級優化的Buffer結合，可在室溫下保持穩定的螢光強度，即使在鹽、遊離核苷酸、溶劑、去污劑或蛋白質等常見污染環境中也具有極強的適用性，確保準確定量；
穩定性佳：在4℃或25℃下處理6個月後性能無明顯變化；
應用範圍廣泛：操作過程簡單，可快速定量寡核苷酸、引子、變性DNA、單股環狀DNA等。
A.重複性好：在不同的Qubit儀器、不同類型的樣品中進行定量分析
圖1. 不同批次在不同Qubit儀器上的穩定性測試
B.穩定性佳：標準品及1×工作液穩定性測試，37℃放置10天，螢光訊號穩定。長期穩定性監測25℃儲存6個月，產品效能與4℃控制一致。
表5. 標準品與樣品穩定性測試
| 4℃保存 一個月 | 4℃保存 兩個月 | 25℃保存 兩個月 | 25℃保存 六個月 | |||||||||
| 標準 | 值 1 | 值 2 | 平均值 | 值 1 | 值 2 | 平均的 | 值 1 | 值 2 | 平均值 | 值 1 | 值 2 | 平均的 |
| 標準＃1 | 116.06 | 14.76 | 115.41 | 124.31 | 125.04 | 124.68 | 112.08 | 110.24 | 111.16 | 131.91 | 135.41 | 133.66 |
| 標準＃2 | 18160.57 | 18348.57 | 18254.60 | 21006.58 | 20974.62 | 20990.60 | 19668.22 | 19078.36 | 19373.30 | 22421.78 | 22205.65 | 22313.72 |
| 樣本 | 濃度 1 | 濃度 2 | 平均值 | 濃度 1 | 濃度 2 | 平均的 | 濃度 1 | 濃度 2 | 平均值 | 濃度 1 | 濃度 2 | 平均值 |
| 範例 1 | 11.70 | 12.20 | 11.95 | 13.30 | 13.00 | 13.15 | 12.70 | 11.70 | 12.20 | 12.90 | 12.40 | 12.65 |
| 範例 2 | 18.80 | 18.80 | 18.80 | 19.00 | 18.60 | 18.80 | 19.20 | 18.00 | 18.60 | 17.90 | 18.40 | 18.15 |
| 範例 3 | 1.43 | 1.48 | 1.46 | 1.38 | 1.34 | 1.36 | 1.40 | 1.36 | 1.38 | 1.30 | 1.24 | 1.27 |
| 範例 4 | 5.28 | 5.12 | 5.20 | 5.76 | 5.78 | 5.77 | 6.10 | 5.72 | 5.91 | 5.62 | 5.72 | 5.67 |
| 範例 5 | 2.20 | 2.16 | 2.18 | 2.02 | 2.00 | 2.01 | 2.10 | 2.14 | 2.12 | 1.95 | 1.94 | 1.95 |
| 範例 6 | 1.64 | 1.61 | 1.63 | 1.50 | 1.47 | 1.49 | 1.68 | 1.67 | 1.68 | 1.45 | 1.42 | 1.44 |
Yeasen NGS定量產品選擇指南
| 產品類別 | 產品 | 目錄編號 | 定量範圍 |
| 雙股DNA高通量 | Qubit 的 dsDNA HS 檢測試劑盒® | 12640ES | 0.2-100納克； 10 皮克/微升 - 100 奈克/微升 |
| Picogreen dsDNA 定量試劑 | 12641ES | ||
| 1×dsDNA HS 檢測試劑盒 | 12642ES | ||
| 雙股DNA | 雙股DNA BR檢測試劑盒 | 12643ES | 2-1000納克； 0.1 奈克/微升 - 1000 奈克/微升 |
| 單鏈DNA量子比特 | Qubit 的 ssDNA 檢測試劑盒® | 12645ES | 1–200ng； 50 皮克/微升 - 200 奈克/微升 |