美國國家藥品監督管理局藥品審查中心（CDE）在基因治療產品指導原則中明確提出，要控制DNA殘留量及殘留片段大小，建議DNA殘留片段大小盡量控制在200bp以下。因此，去除生物製藥中殘留的核酸極為重要。隨著生產過程日益複雜，有效去除高鹽環境中殘留的核酸面臨許多新的挑戰：

在AAV病毒的純化過程中，為了提高病毒回收率，通常會使用較高鹽濃度（200-500 mM）的緩衝液。然而，隨著鹽濃度的增加，傳統核酸酶的活性顯著下降。如果透過增加酵素量和孵育時間來提高純化效果，則會大大增加成本
宿主DNA通常以染色質的形式存在，容易被蛋白質包裹，使得DNA無法接近。在高鹽環境下，核酸與蛋白質能有效分離，以便更好地去除殘留核酸
AAV等病毒載體會因靜電作用而聚集，在低離子強度和有DNA殘留的條件下更容易發生這種聚集，導致穩定性降低，影響產量。提高鹽濃度可有效降低AAV病毒顆粒聚集，提高AAV病毒顆粒的回收率

Salt Active UltraNuclease（耐鹽廣譜核酸酶）是一種源自海洋微生物的重組非特異性核酸內切酶。與UltraNuclease相比，它在500 mM鹽濃度下表現出最佳活性，即使在高鹽環境中也能有效去除核酸污染。

產品應用場景

生物製品中殘留核酸的去除：在病毒、疫苗、蛋白質等生物製品生產過程中，可以添加UltraNuclease來降解殘留核酸。此步驟不僅增加了病毒的產量，而且顯著降低了殘留核酸的含量，從而確保了藥物的安全性和有效性。
降低黏度：透過降解核酸，降低細胞裂解物的黏度，這有助於在純化細胞衍生顆粒（如病毒、AAV 載體和包涵體）過程中進行過濾/超濾過程。
提高解析度和恢復率：在 ELISA、二維電泳和免疫印跡分析中，它提高了解析度和恢復率。
防止細胞聚集：UltraNuclease能有效防止人類週邊血單核細胞（PBMCs）的聚集。

產品性能測試

高鹽環境對酵素活性的影響（Na+）

為了配合使用 Salt Active UltraNuclease， Yeasen 還自主研發了 鹽活性超核酸酶，可有效檢測酵素殘留，降低風險。鹽活性超核酸酶ELISA試劑盒依據2020版中國藥典分析方法驗證指導原則<9101>研發生產，嚴格遵循多參數檢測的關鍵要求（線性範圍、特異性、準確度、精密度、靈敏度、加速穩定性等）。

為此， Yeasen Biotech 已經開發出一種用於檢測 Salt Active UltraNuclease 的 ELISA 試劑盒。本試劑盒採用雙抗體夾心酵素連結免疫吸附試驗（ELISA）的原理，檢測鹽活性超核酸酶。將Salt Active UltraNuclease的標準品及檢測樣本加入到預先包覆有抗Salt Active UltraNuclease抗體（36703-A）的酵素包被板中。然後，加入稀釋的生物素標記的核酸酶檢測抗體 (36703-C)，然後加入鏈黴親和素-HRP (SA-HRP) (36703-D)。這形成抗體 + 抗原 + 抗體-生物素 + SA-HRP 複合物。洗板後加入TMB底物溶液（36703-H）顯色。在HRP酶催化下，TMB由無色變成藍色，最後在終止液（36703-I）作用下變成黃色。黃色的強度與樣本中檢測到的高耐鹽通用核酸酶的量成正比。

使用Salt Active UltraNuclease ELISA Kit檢測殘留Salt Active UltraNuclease的實驗過程。

UltraNuclease 和 Salt Active UltraNuclease ELISA 試劑盒的特性：

法規遵從性： 完全按照監管要求進行驗證，可提供驗證報告；

品質保證： 試劑盒所有原料均為自主研發，品質可控；

高靈敏度： 定量極限低至23 pg/mL；

高精度： 批次內重複性高，批次間變異性低；

特異性強： 與其他工程細胞蛋白無交叉反應

性能參數

產品參數	內容
檢測時間	3.5小時
檢測原理	雙位點免疫酵素測定法
訊號放大	生物素-鏈黴親和素系統
檢測波長	450nm 和 630nm
敏感度	0.024納克/毫升
檢測範圍	0.047奈克/毫升~3奈克/毫升
檢測對象	鹽活性超核酸酶
適用儀器	Molecular Devices：M 和 i 系列
應用	細胞與基因治療及重組腺相關病毒疫苗純化過程中殘留核酸酶的檢測

產品數據：

試劑盒標準曲線：

特異性

透過使用本試劑盒檢測7個工序中添加的蛋白質,評估Salt Active UltraNuclease抗體與試劑盒中7種蛋白質的交叉反應性。設立陽性對照(PC-0.047 ng/mL)和陰性對照(NC-0 ng/mL)。

結果顯示，7個工序添加的蛋白濃度接近陰性對照（NC-0 ng/mL），檢測濃度均低於本試劑盒的定量極限（0.047 ng/mL），且未發生交叉反應。觀察到。

年代梭子魚恢復率：

將三個濃度標準品（即 Std1 3 ng/mL、Std3 0.75 ng/mL 和 Std5 0.188 ng/mL）按等比例加入客戶提供的兩個樣品中，進行加標回收實驗。結果顯示,加標回收率均在80%~120%之間。加標回收率%=（加標樣品測量值-未加標樣品測量值）/理論值（標準加入量）*100%。

樣品名稱	Salt Active UltraNuclease檢測濃度（ng/mL）	標準品含量（ng/mL）	檢測結果（ng/mL）	加標回收率 (%)
TS1	0.04	3	1.71	114.00％
		0.75	0.347	92.53%
		0.188	0.085	90.43%
TS2	0.08	3	1.772	118.13%
		0.75	0.405	108.00%
		0.188	0.104	110.64％

準確性

1）重複性

選取高、中、低濃度三種Salt Active UltraNuclease標準品進行重複實驗。同一次實驗中，每個濃度的樣本檢測10次，CV%<10%。

批次內差異
理論濃度（ng/mL）	重複次數	平均值 (ng/mL)	變異係數 CV (%)
1.5	10	1.444	2.97％
0.188	10	0.196	2.27％
0.047	10	0.051	2.56%

2）中等精度

使用不同批次的試劑盒進行3次實驗，每次實驗以高、中、低3個濃度進行，每個濃度重複10次。每個濃度點共獲得30個數據，各濃度的CV%小於15%。

批次差異
理論濃度（ng/mL）	實驗次數	平均值 (ng/mL)	變異係數 CV (%)
1.5	3	1.423	5.70%
0.188	3	0.212	5.59％
0.047	3	0.059	6.82%

產品資訊

產品名稱	產品數位	產品規格
鹽活性超核酸酶 GMP 級	20159ES25/50/60/80/90	25千單位/50千單位/100千單位/1萬單位/5萬單位
鹽活性超核酸酶 ELISA 試劑盒	36703ES96	96T

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