النسخ العكسي، المعروف أيضًا باسم بوليميراز الحمض النووي المعتمد على الحمض النووي الريبي، هو إنزيم بوليميراز الحمض النووي الذي ينسخ الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة إلى الحمض النووي. سيؤثر أداء النسخ العكسي بشكل مباشر على الأداء النهائي لكاشف التشخيص الجزيئي. استجابةً لنقاط الألم لدى مصنعي كواشف التشخيص الجزيئي، أجرت شركة Yeasen التحويل الاتجاهي على النسخ العكسي. يتمتع النسخ العكسي بأداء ممتاز ويحظى باستقبال جيد من العملاء!

1. ما هي وظيفة النسخ العكسي؟
2. كيفية اختيار النسخ العكسي؟
3. لماذا تختار النسخ العكسي لـ Yeasen؟
4. المنتجات ذات الصلة والأداء
5. المنتجات ذات الصلة

1. ما هي وظيفة النسخ العكسي؟

النسخ العكسي هو بوليميراز DNA يعتمد على الحمض النووي الريبي. يمكنه نسخ الحمض النووي الريبي القالب وتكوين الحمض النووي التكميلي (cDNA). يتم تحويل الحمض النووي التكميلي أحادي السلسلة إلى الحمض النووي ثنائي السلسلة باستخدام بوليميراز الحمض النووي. لذلك تُستخدم النسخ العكسي عادةً لقياس مستوى تخليق mRNA عند دمجه مع تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل، والتي تسمى RT-PCR. تُستخدم اختبارات RT-PCR الكمية عادةً في تشخيص الأمراض. لذلك، تلعب النسخ العكسي دورًا مهمًا في البحث العلمي والتطبيق العملي.

2. كيفية اختيار النسخ العكسي؟

إن النسخ العكسي الشائع هو M-MLV وAMV، ومن بينهما M-MLV أفضل من AMV. ولكن إنزيمات النسخ العكسي التقليدية لها موقعان نشطان، أحدهما ينفذ أنشطة البوليميراز والآخر ينفذ نشاط الريبونوكلياز H. إن RNase H هو نوكلياز داخلي قادر على تحلل مجموعة الحمض النووي الريبي من عائلة الهجائن DNA–RNA. لذلك، فإن النسخ العكسي الذي يفتقر إلى نشاط RNase H مفيد لتخليق cDNA. بالإضافة إلى ذلك، فإن استخدام نسخة مستقرة حراريًا من RT مفيد لخفض تضخيم الأحماض النووية غير النوعية وتقليل تأثير الهياكل الثانوية المعقدة.

3. لماذا تختار النسخ العكسي لـ Yeasen؟

أجرى Yeasen تعديلاً اتجاهياً على النسخ العكسي، مما أدى إلى إزالة نشاط RNase H، وبالتالي تحسين قدرة تخليق cDNA. باستخدام تقنية تطور البروتين لتحسين الثبات الحراري للنسخ العكسي.

لا تتمتع إنزيم النسخ العكسي من شركة Yeasen بقدرة تصنيع قوية فحسب، بل تتمتع أيضًا بقدرة تحمل قوية. بالإضافة إلى ذلك، فإن شركة Yeasen لديها متطلبات صارمة فيما يتعلق بالجودة. إنها الخيار الأفضل للنسخ العكسي.

4. المنتجات ذات الصلة والأداء

4.1 مقاومة لدرجات الحرارة العالية التي تصل إلى 65 درجة مئوية

باستخدام 500 نانوجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي لخلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي عند درجة حرارة تتراوح بين 42 درجة مئوية و65 درجة مئوية باستخدام Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase. خذ 1 ميكرولتر من cDNA كقالب لتضخيم جين TFRC (4.4 كيلو بايت).

الشكل 1. إجراء النسخ العكسي عند درجة حرارة 42 درجة مئوية إلى 65 درجة مئوية

4.2 متوافق مع القوالب المعقدة

يمكن لدرجة حرارة التفاعل البالغة 55 درجة مئوية أن تلبي النسخ العكسي للقوالب التقليدية وقوالب البنية الثانوية، ويمكن زيادة درجة حرارة تفاعل قوالب GC العالية بشكل مناسب إلى 65 درجة مئوية.

الشكل 2.مناسب لقوالب GC الغنية وقوالب البنية الثانوية

4.3 أداء تمديد ممتاز

باستخدام 500 نانوجرام من إجمالي الحمض النووي الريبي لخلايا 293T كقالب وOligo(dT) كبادئ، تم تصنيع الحمض النووي التكميلي باستخدام Hifair™ 3 Reverse Transcriptase. خذ 1 ميكرولتر من الحمض النووي التكميلي كقالب لتضخيم 500 زوج قاعدي من 5' من جين DY1C1N1 (19.9 كيلو بايت). أظهرت النتائج أن Hifair™ 3 Reverse Transcriptase يمكنه تصنيع الحمض النووي التكميلي حتى 19.8 كيلو بايت.

الشكل 3. يمكن تصنيع ما يصل إلى 19.8 كيلو بايت من الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين

4.4 التوليف السريع

باستخدام الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين لخلايا 293T كقالب، تم إجراء النسخ العكسي وفقًا للإجراء القياسي في الدليل، وتم ضبط وقت النسخ العكسي وفقًا لـ 5 و10 و15 و30 و45 و60 دقيقة على التوالي. يمكن لـ Hifair™ III Reverse Transcriptase تخليق cDNA بحجم 6 كيلو بايت في غضون 5 دقائق، كما أن خصوصيتها وإنتاجيتها متفوقتان على تلك الخاصة بالعلامة التجارية V.

الشكل 4. يمكن تصنيع 6 كيلو بايت من cDNA في غضون 5 دقائق

4.5 نطاق خطي واسع

باستخدام 5 بيكو جرام - 5 ميكرو جرام من إجمالي الحمض النووي الريبي لخلايا 293T كقالب، تم تصنيع الحمض النووي الريبي التكميلي باستخدام Hifair™ III Reverse Transcriptase. تم استخدام 1 ميكرولتر من الحمض النووي الريبي التكميلي كقالب، وتم إجراء qPCR على الجينات الأربعة، وأظهرت النتائج أن كفاءة التضخيم كانت جميعها بين 98% و100.10%. وهذا يوضح أنه يمكن تصنيع الحمض النووي الريبي التكميلي بكفاءة في نطاق خطي واسع من القوالب.

الشكل 5. يمكن تصنيع الحمض النووي التكميلي بكفاءة في نطاق واسع من القوالب

4.6 مراقبة الجودة الصارمة

لضمان الأداء المستقر لإنزيم عكسي من شركة Yeasen، تطبق شركة Yeasen بشكل صارم المتطلبات في عملية الإنتاج لتثبيت عملية الإنتاج وضمان استقرار الدفعة. وفي الوقت نفسه، يتم تعزيز فحص الجودة للكشف عن البقايا بما في ذلك النوكلياز الخارجي والنيكاس وRNase وما إلى ذلك، التأكد من عدم وجود أي بقايا، حتى لا تؤثر على التجارب اللاحقة.

الشكل 6. الكشف عن البقايا

5. المنتجات ذات الصلة

المنتجات التي تقدمها شركة Yeasen هي كما يلي.

الجدول 1. المنتجات ذات الصلة

بخصوص القراءة

المبادئ التوجيهية لاختيار النسخ العكسي

YEASEN UDG: "الخبير في مكافحة التلوث" في تفاعلات PCR