Linear PEI 40000، كاشف نقل جينات أكثر كفاءة
بشكل عام، يعتبر التحويل الجيني عملية إدخال الأحماض النووية (DNA أو RNA) بشكل مصطنع إلى الخلايا حقيقية النواة. إن كواشف التحويل الجيني، كما يوحي اسمها، عبارة عن سلسلة من الكواشف المشاركة في التحويل الجيني. أثناء عملية التحويل الجيني، غالبًا ما نواجه مشكلة انخفاض كفاءة التحويل الجيني، ونطاق التطبيق الضيق، والسمية الشديدة، والتشغيل المرهق، والسعر الباهظ لكواشف التحويل الجيني. لذا، هل يوجد كاشف تحويل جيني يمكنه حل هذه المشكلات؟ نعم، يعتبر PEI الخطي هو الخيار الأفضل لحل هذه المشكلات.
ملاحظة: أطلقت شركة Yeasen برنامج Novel PEI كاشف نقل الجينات Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV لإنتاج كميات كبيرة من ناقلات الفيروسات المختلفة والتعبير المؤقت عن البروتينات المناسبة للأنظمة الملتصقة والمعلقة.
1. ما هي أنواع انتقال الخلايا؟
2. ما هو خطي PEI MW 40000؟
3. كيف يعمل خطي PEI MW 40000؟
4. ما هي ميزات PEI MW 40000؟
5. كواشف نقل جينية أخرى من شركة Yeasen
6. الاهتمام بالقراءة
1. ما هي أنواع انتقال الخلايا؟
قبل تقديم PEI MW 40000 الخطي، دعونا أولاً نفهم بإيجاز أنواع النقل الخلوي. النقل الخلوي له أهمية كبيرة في البحث الجيني، وبحث البروتين، وبحث علم الخلايا، والذي يشير إلى عملية إدخال الأحماض النووية (DNA أو RNA) بشكل مصطنع إلى الخلايا باستخدام وسائل العدوى غير الفيروسية. الغرض الرئيسي من النقل هو دراسة وظيفة الجينات أو منتجات الجينات، عن طريق تعزيز أو تثبيط التعبير الجيني المحدد في الخلايا، أو لإنتاج البروتينات المؤتلفة. سيؤدي إدخال الأحماض النووية الخارجية إلى تغيير خصائص الخلايا، وذلك لتحقيق غرض النقل، وهو أمر مفيد لدراسة تنظيم الجينات والتعبير البروتيني، وكذلك تخليق وإنتاج البروتينات.
يمكن تقسيم انتقالات الخلايا بالطرق الكيميائية والبيولوجية والفيزيائية، أو حسب مدة بقاء الجين الغريب في الخلية. في الانتقال المؤقت، يمكن للحمض النووي المُدخل أن يبقى في الخلية لفترة محدودة دون أن يتضاعف، بينما في الانتقال المستقر، يتم دمج الحمض النووي المُدخل في جينوم المضيف ويمكن التعبير عنه في نسل الخلية المُنقلة.
مع وجود العديد من طرق نقل الخلايا المختلفة، كيف نختار الطريقة الصحيحة؟
لا توجد طريقة نقل جينية واحدة مناسبة لجميع أنواع الخلايا وتلبي جميع الاحتياجات التجريبية. يجب اختيار طريقة النقل الجيني المثالية وفقًا لمتطلبات نوع الخلية والظروف التجريبية.
في الوقت الحاضر، لا تزال كواشف النقل الكيميائي هي الطرق السائدة لنقل الخلايا بسبب سهولة تشغيلها وتوافقها مع مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا.
2. ما هو خطي PEI MW 40000؟
بولي إيثيلين إيمين خطي (PEI) MW40000 (التحلل السريع) هو كاشف انتقالي مؤقت يعتمد على بولي إيثيلين إيمين بوزن جزيئي 40000 (PEI 40000). PEI 40000 هو بوليمر كاتيوني مشحون للغاية يمكنه بسهولة الارتباط بجزيئات الحمض النووي المشحونة سلبًا لتكوين معقدات، وبالتالي إدخال معقدات إلى الخلايا.
بالمقارنة مع كاشف النقل الجيني PEI 25000، فإن PEI 40000 سهل الذوبان ويمكن إذابته مباشرة في الماء. بالإضافة إلى ذلك، يحتوي PEI 25000 على 4-11% من بقايا البروبيونيل، مما يمنع العمود الفقري للبوليمر من الارتباط بالحمض النووي.لكن PEI 40000 عبارة عن بناء سقيفة كامل، لذا فإن أداءه فعال باستمرار.
3. كيف يعمل خطي PEI MW 40000؟
يعد البولي إيثيلين إيمين (PEI) ناقلًا غير فيروسي متعدد الوظائف ممتازًا يتمتع بقدرة التصاق جيدة بالخلايا ويمكن استخدامه لنقل الخلايا بشكل مستقل عن مثبطات الليزوزوم. يرتبط البولي إيثيلين إيمين والحمض النووي بقوى كهروستاتيكية، مما يتسبب في انهيار الحمض النووي من البنية الملفوفة السائبة إلى مجمعات جسيمات كروية. عادة ما تكون مجمعات البولي إيثيلين إيمين والحمض النووي مشحونة إيجابيا للتفاعل كهروستاتيكيا مع الغشاء الخلوي الخارجي ويتم امتصاصها عن طريق البلعمة الخلوية. ثم يتم التقاط مجمعات البولي إيثيلين إيمين والحمض النووي التي تم إدخالها إلى الخلايا بواسطة الحويصلات لنقلها إلى الحويصلات للتحلل. يتسبب الضغط الأيوني الداخلي المتزايد باستمرار في تضخم الحويصلات وتمزقها، مما يؤدي إلى إطلاق الحمض النووي الغريب في السيتوبلازم. تسمى آلية النقل هذه "تأثير إسفنجة البروتون".
أظهرت الدراسات أن جزيئات PEI يمكنها تغطية سطح مجمعات PEI-DNA لحماية الحمض النووي بشكل كافٍ من التحلل بواسطة النوكليازات في السيتوبلازم، مما يضمن انتقال الحمض النووي الغريب من السيتوبلازم إلى النواة. علاوة على ذلك، يمكن لجزيئات PEI الدخول في أغشية الفسفوليبيد وإنشاء قنوات مستقرة لنقل الحمض النووي إلى نواة الخلية. لا تدخل جزيئات PEI إلى نواة الخلية وتلعب دورًا مهمًا كناقل للحمض النووي.
يمكن اكتشاف التعبير الجيني بعد 1-4 أيام من إدخال الجين الخارجي إلى الخلايا الثديية. يرجع هذا التعبير إلى حقيقة أن جزءًا من الحمض النووي المُدخل يتم نسخه إلى mRNA بعد دخول النواة، ثم يتم ترجمته إلى السيتوبلازم. نظرًا لأن هذه الطريقة بسيطة نسبيًا وسهلة التنفيذ، فمن خلال اختيار ناقل تعبير جيد وطريقة نقل، يمكن أن تصل كمية التعبير عن البروتين إلى مستوى أعلى. تم استخدام كواشف نقل PEI على نطاق واسع في البحث العلمي والتطبيقات الصناعية كطريقة نقل شائعة لدراسة بنية البروتين ووظيفته.
4. ما هي ميزات PEI MW 40000؟
باعتباره كاشف انتقال عابر ذو سمية خلوية منخفضة، يتمتع PEI 40000 بكفاءة انتقال عالية وكفاءة عالية في التعبير الجيني في الخلايا مثل HEK293 وCHO. تم التحقق من صحة كاشف انتقال PEI الخطي لمجموعة واسعة من سلالات الخلايا بما في ذلك خلايا HEK-293 وHEK293T وCHO-K1 وCOS-1 وCOS-7 وNIH/3T3 وHepG2 وHela. تصل كفاءة الانتقال إلى 80%~90%. تابع عرض بيانات الأداء:
- كفاءة نقل عالية، مناسبة للخلايا الملتصقة والمعلقة
إنه مناسب لمجموعة متنوعة من خطوط الخلايا بما في ذلك خلايا HEK-293، HEK293T، CHO-K1، COS-1، COS-7، NIH/3T3، Sf9، HepG2، وHela، وما إلى ذلك، وتصل كفاءة النقل إلى 80% ~ 90%.
الجدول 1.قائمة خطوط الخلايا المعتمدة
| الخلايا الملتصقة (1 ميكروجرام من الحمض النووي) | كفاءة | خلايا التعليق (2 ميكروجرام من الحمض النووي) | كفاءة |
| هيك-293 | 80%-90% | تشو-ك1 | 85% |
| س ف 9 | 80%-90% | هيك-293T | 70%-80% |
| التهاب الكبد G2 | 80%-90% | تي اتش بي-1 | 70%-80% |
| هيلا | 80%-90% |
| |
الشكل 2. تم تحويل البلازميد GFP بواسطة PEI 40000 إلى الخلايا الملتصقة HEK-293، وصلت كفاءة التحويل إلى 90% بعد 72 ساعة (على اليسار)؛ تم تحويل البلازميد GFP بواسطة PEI 40000 إلى خلايا تعليق CHO-K1، ووصلت كفاءة التحويل إلى 80% بعد 72 ساعة (على اليمين)
- سمية منخفضة
ويضمن بقاء الخلايا ويحسن كفاءة النقل.
الشكل 3. يتميز PEI 40000 الذي توفره YEASEN بسمية خلوية أقل بكثير من البوليمرات المنافسة**
- كفاءة النقل أعلى من كفاءة PEI 25000، والتي يمكنها استبدال PEI 25000 تمامًا
يحتوي PEI 25000 على 4-11% من بقايا البروبيونيل، مما يمنع العمود الفقري للبوليمر من الارتباط بالحمض النووي. وبالمقارنة مع PEI 25000، فإن PEI 40000 عبارة عن بناء سقيفة كامل، لذا فإن أدائه فعال باستمرار.
الشكل 4. تم تحويل خلايا HEK-293 مؤقتًا باستخدام بلازميد GFP باستخدام كواشف التحويل PEI 25000 وPEI 40000، وتم ملاحظة الفلورسنت بعد 72 ساعة. النتائج التجريبية: كفاءة نقل PEI 40000 أفضل من PEI25000.
- تكوين بسيط ووقت انتقال قصير
هذا المنتج من النوع الفوري، والذي يمكن إذابته مباشرة في الماء دون تعديل الرقم الهيدروجيني. وهو متوافق مع المصل والمضادات الحيوية، ولا حاجة لتغيير الوسط.
- فعّالة من حيث التكلفة، ومناسبة للانتقال العابر على نطاق واسع
بالمقارنة مع المنتجات المستوردة، فإن كاشف التحويل Yeasen PEI 40000 يتميز بسعر منخفض ودفعات مستقرة.
5. كواشف التحويل الجيني الأخرى من شركة Yeasen
تتمتع شركة Yeasen بخط إنتاج كامل من كواشف التحويل الجيني، بما في ذلك طرق التحويل الكيميائي السائدة حاليًا، وكواشف الليبوزوم الكاتيوني، وكواشف البوليمر الكاتيوني، والتي يمكن تطبيقها على مجموعة متنوعة من سيناريوهات الاستخدام. في هذا القسم، نسرد جميع كواشف التحويل الجيني من شركة Yeasen وتطبيقاتها في الجدول التالي، ويمكنك اختيار أفضلها المناسب لتجربتك.
الجدول 2.قائمة كواشف تحويل جين ييسن
| قطة# | اسم المنتج | نوع الحمض النووي | نوع الخلية |
| 40823ES | الحمض النووي | متمسك و خلايا التعليق | |
| 40816ES | الحمض النووي | متمسك و خلايا التعليق | |
| 40820ES | الحمض النووي | متمسك و خلايا التعليق | |
| 40821ES | الحمض النووي | متمسك و خلايا التعليق | |
| 40802ES | DNA (<10kb)، shRNA | أالخلايا الخلفية | |
| 40805ES | تعليق Hieff Trans™ الخالي من الخلايا كاشف نقل الليبوسوم (الاستفسار) | الحمض النووي (<10 كيلو بايت) | خلايا التعليق(لـ خلايا الدم المعلقة أو المناعة الخلايا، كفاءة النقل من الكواشف الكيميائية الحالية هي ليس مرتفعا. طريقة الكهرومسام أو الفيروس يوصى بها.) |
| 40806ES | الرنا المتداخل صغير الحجم、ميكرو رنا、ما قبل miRNA، مقلد miRNA، مضاد miRNA | الخلايا الملتصقة والمعلقة |
6. الاهتمام بالقراءة
كاشف التحويل الجيني – Hieff Trans™ وPEI
دليل اختيار منتج كواشف نقل الخلايا في المختبر
مرجع:
[1] لو، ي.، ياو، ج.، وتشو، ج. (بدون تاريخ). سلوك تكوين وتجميع معقدات بولي إيثيلين إيمين-دي إن إيه. قسم الصيدلة، نانجينغ 210009.
[2] سابين، جيه، وآخرون (2022). رؤى جديدة حول آلية انتقال البولي إيثيلين إيمين وتأثيراتها على العلاج الجيني ولقاحات الحمض النووي. الغرويات والأسطح ب: الواجهات الحيوية، 210، 112-19.
[3] نقل الخلايا الثديية العابرة باستخدام بولي إيثيلين إيمين (PEI). لونجو با، كافران جيه إم، كيم إم إس، ليهي دي جيه