- RT-qPCR drevet af højeffektiv revers transkriptase
Revers transkriptase (RT-enzym) er et enzym, der er i stand til at omdanne RNA-skabeloner til komplementært DNA (cDNA). I molekylærbiologisk forskning er revers transkriptase udbredt, og spiller især en uundværlig rolle inden for molekylær diagnostik. Gennem processen med revers transkription kan RNA-genomet af vira omdannes til cDNA, som derefter kan amplificeres og detekteres ved hjælp af teknikker såsom qPCR. Denne egenskab muliggør nøjagtig diagnose af RNA-vira, såsom HIV, influenza A og influenza B.
Figur 1. Skematisk diagram af omvendt transkriptionsproces
Forfølgelsen af RT-qPCR molekylære diagnostiske reagenser, der er hurtigere, mere følsomme og nemmere at betjene, er blevet den nuværende store udviklingstendens. Som et af nøgleråmaterialerne i RT-qPCR-processen skal revers transkriptase have hurtigere revers transkriptionshastighed, højere synteseudbytte og bedre varmebestandighed. For at opnå en revers transkriptase mere egnet til RT-qPCR, Yeasen har udviklet HifairenTM serie af reverse transkriptaser gennem genetisk modifikation baseret på M-MLV, med lavere RNase H-aktivitet, højere termisk stabilitet og stærkere kontinuerlig synteseevne.
Figur 2. Skematisk over omvendt transkriptionshandling
Hifair™Reverse transkriptaser
Yeasen har en række HifairTM revers transkriptase, og kan give en række forskellige produktformer, herunder enzym og premix, du kan vælge efter de faktiske behov. Følgende tabel viser karakteristika og anbefalede anvendelser af forskellige Yeasen reverse transkriptaser.
Tabel 1 Udvælgelsesvejledningen af Hifair™ Reverse transkriptaser| Produktnavn (produktnummer ) | Produktegenskaber | Anbefalet anvendelse |
| Termisk stabil (op til 65°C), velegnet til komplekse skabeloner | RT-LAMPE | |
| Stærk kompatibilitet, høj hastighed og højt synteseudbytte | Et-trins RT-PCR/qPCR |
Bemærk: Alle ovennævnte enzymer er tilgængelige i højkoncentrations- eller ikke-glycerolformuleringer.
Vi fremhæver nu en revers transkriptase brugt i RT-qPCR molekylære diagnostiske reagenser: HifairTM V Omvendt transkriptase. Dette enzym er kendetegnet ved dets stærke kompatibilitet, hurtige hastighed og høje synteseudbytte, der er i stand til at udholde reaktionstemperaturer op til 58°C. Det er særligt velegnet til udvikling af RT-qPCR molekylære diagnostiske reagenser.
Præstationsdemonstration af Hifair™ V revers transkriptase
1. Den er i stand til at modstå en reaktionstemperatur på 58°C og er velegnet til omvendt transkription af komplekse RNA-skabeloner.
Figur 3. Den omvendte transkriptase af HifairTM V Revers Transcriptase og mærket T* blev inkuberet ved henholdsvis 55 ℃ og 58 ℃ i 30 minutter for at påvise den resterende enzymaktivitet. Resultaterne viste, at HifairTM V omvendt transkriptase kunne stadig opretholde 70 % aktivitet efter inkubation ved 58 ℃ i 30 minutter, hvilket var meget højere end det for mærket T*.
2. Detektionshastigheden for RT-qPCR var bedre end for andre mærker,og tdetektionsområdet var 1 pg-1 μg.
Figur 4. Ved at bruge 1 pg-1 μg (7 gradienter) totalt RNA fra 293T-celler som skabelon, blev revers transkription udført med HifairTM V et-trins RT-gDNA-fordøjelse SuperMix til qPCR(Cat#11142), V*, T*. Det opnåede cDNA blev kvantitativt analyseret ved qPCR. Resultaterne viste, at følsomheden af 11142ES kunne nå 1 pg, hvilket var bedre end andre mærkers.
Den omvendte transkriptase mutant Library of Yeasen
Yeasen fortsætter med at fremme udviklingen af revers transkriptase med dens ZymeEditorTM platform. Indtil videre har vi frasorteret en række revers transkriptase-mutanter med fremragende ydeevne i forskellige anvendelser, som fuldt ud kan opfylde behovene hos forskellige kundegrupper inden for forskellige anvendelsesområder.Tabel 2. De omvendt transkriptase Mutant Selection Guide af Yeasen
Anbefalede produkter
| Produktklassificering | Produktnavn | Katalog nr. |
| Højtydende PCR-enzymserie | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |