1. Hvordan forhindrer man RNA i at blive nedbrudt?

2. Hvad er RNase-hæmmere?

3. Hvad gør RNase-hæmmer?

4. Hvad er egenskaberne ved en murin RNase-hæmmer?

5. Relaterede produkter og ydeevne

6. Relaterede produkter

7. Ofte stillede spørgsmål

1. Hvordan forhindrer man RNA i at blive nedbrudt?

RNase spiller en vigtig rolle i nukleinsyremetabolisme og kan findes i næsten enhver type prokaryot og eukaryot. RNase udskilles i kropsvæsker såsom tårer, spyt og sved for at forsvare sig mod invasionen af ​​mikroorganismer, og RNase er også til stede i hudaffald. Imidlertid er hovedkilden til RNase i de fleste miljøer mikroorganismer, nemlig bakterier og svampe. RNase er ekstremt svært at inaktivere og udviser høj stabilitet, varmebestandighed, syrebestandighed og alkaliresistens. Efter termisk denaturering kan den hurtigt genvinde sin oprindelige struktur. RNase er normalt meget aktiv og er bredt fordelt i både eukaryote og prokaryote celler og væv. RNA'et i prøven kan fuldstændigt nedbrydes med kun en spormængde af RNase-kontamination. RNase-kontamination i undersøgelser kan komme fra både interne og eksterne kilder. RNase i celler er primært en endogen kilde til kontaminering, mens eksogene kilder omfatter eksperimentelle forsyninger, laboratoriemiljøet og forsøgslederne selv. RNaser, især medlemmer af RNase A-familien, er små, kompakte proteiner, der indeholder nogle få cysteinrester, der er i stand til at danne mange intramolekylære disulfidbindinger. Efter tilbagevenden til stuetemperatur, i fravær af et denatureringsmiddel, vil den denaturerede RNase genoprette sin naturlige struktur og nogle funktioner. Derfor bevarer RNaser betydelig aktivitet efter gentagne fryse-tø-cyklusser, selv efter autoklavering. Den stabile natur af disse enzymer gør dem modstandsdygtige over for mange dekontamineringsmetoder, som normalt kræver aggressive kemiske metoder for at eliminere RNaser fra overflader og opløsninger.

For at undgå nedbrydning af sårbart RNA skal der tages særlige forholdsregler ved arbejde med RNA. For at kontrollere eksogen RNase skal operatøren bære handsker under eksperimentet og skifte handsker efter at have rørt huden, dørhåndtagene og overfladen af ​​almindelige genstande. Og operatøren skal bruge en speciel pipettepistol til RNA-drift og bruge RNase-fri vægspidser, centrifugerør, forbindelser og reagenser. Hold dig væk fra eller tildæk ventilationshuller og åbne vinduer, og brug mindre befærdede områder som RNase-frie områder. Og under RNA-ekstraktion og -analyse må du ikke udføre andre eksperimenter, der kan forårsage RNase-kontamination.
Metoden til at hæmme aktiviteten af ​​endogen RNase er for det første at bevare prøven. Efter at vævet er udtaget, bør RNA'et ikke ekstraheres direkte. I stedet skal det hurtigt fryses og opbevares i et -80°C miljø med flydende nitrogen i tide, og forsøget skal udføres så hurtigt som muligt for at minimere nedbrydningen af ​​RNA.RNase-hæmmere tilsættes til cellelysatet for samtidig at bryde celler og inaktivere RNase, hvilket minimerer aktiviteten af ​​RNase frigivet under cellebrud. Alle reagenser og udstyr skal behandles specielt for at inaktivere RNaser før brug.

Derudover kan RNA-hæmmere bruges til at hæmme RNase-aktivitet og forhindre RNase-nedbrydning af RNA. Der er flere typer RNA-hæmmere:

• Diethylpyrocarbonat (DEPC): Det er en stærk, men ikke komplet RNase-hæmmer. Det denaturerer proteinet gennem kombinationen af ​​imidazolringen af ​​histidin i den aktive gengruppe af RNase og hæmmer derved enzymets aktivitet.
• Guanidinisothiocyanat: Anses i øjeblikket for at være den mest effektive RNase-hæmmer, den kan også inaktivere RNase, mens den lyser væv, hvilket kan ødelægge cellestruktur og adskille nukleinsyre fra nukleoprotein, og har også en vis effekt på RNase Stærk denaturerende effekt.
• Vanadylribonukleosidkompleks: et kompleks dannet af vanadiumoxidioner og nukleosider, som kan kombineres med RNase for at danne en overgangsanalog, der næsten fuldstændigt hæmmer aktiviteten af ​​RNase.
• Proteinhæmmer af RNase (RNasin): et surt glycoprotein ekstraheret fra rottelever eller human blastodisc, RNasin er en ikke-konkurrerende hæmmer af RNase, som kan binde til en række forskellige RNaser, hvilket gør det inaktiveret.
• Andre: SDS, urinstof, diatoméjord osv. har også en vis hæmmende effekt på RNase.

2. Hvad er RNase-hæmmere?

RNase-hæmmere er en klasse af stoffer, der kan hæmme RNase-aktivitet. Almindelige RNase-hæmmere omfatter diethylpyrocarbonat (DEPC), guanidinisothiocyanat, ribonukleosidvanadylkomplekser (RVC) og proteinhæmmere af RNase (RNasin). Blandt dem har DEPC og guanidin isothiocyanat en vis toksicitet, og RVC har en hæmmende effekt på PCR-polymerase, hvilket ikke er befordrende for efterfølgende eksperimenter. RNasin er ikke giftigt og er en ikke-kompetitiv hæmmer af RNase, som kan binde til forskellige RNaser for at inaktivere dem.

3. Hvad gør RNase-hæmmer?

RNase-hæmmere anvendes almindeligvis som en sikkerhedsforanstaltning i enzymatiske manipulationer af RNA for at hæmme og kontrollere sådanne kontaminanter. RNasin er et surt glycoprotein ekstraheret fra rottelever eller human blastoderm, som specifikt kan binde til RNase på en ikke-kovalent måde for at danne et kompleks, hvilket forårsager RNase-inaktivering og derved beskytter integriteten af ​​RNA. På nuværende tidspunkt hjælper RNase-hæmmeren med at forhindre RNA-nedbrydning i applikationer som cDNA-syntese, RT-PCR, in vitro transkriptions-/translationsreaktioner eller RNA-oprensning.

4. Hvad er egenskaberne ved en murin RNase-hæmmer?

Rekombinante murine RNase-hæmmere indeholder ikke 2 oxidationsfølsomme cysteiner, som er indeholdt i RNase-hæmmere af human oprindelse. Derfor har murin RNase-hæmmer høj antioxidationsaktivitet og er mere stabil til eksperimenter med lavt DTT. Derudover har Murine RNase Inhibitor of Yeasen følgende funktioner:
1) All-around RNase-hæmning: Murin RNase-hæmmer af YEASEN hæmmer specifikt RNase A, RNase B, RNase C, og så videre.
2) Alsidige reaktionsbetingelser: RNase-hæmmer er aktiv ved pH 5,0-9,0 og 25℃-55℃, hvilket er velegnet til termostabil revers transkriptase.
3) Mulige multiple downstream-eksperimenter: Ingen hæmning af polymeraseaktivitet observeres, når RNase-inhibitor anvendes sammen med Taq DNA-polymerase, AMV eller M-MuLV revers transkriptase eller fag-RNA-polymeraser (SP6, T7 eller T3).
4) Masseproducerede varer: En enkelt produktionskapacitet på 2 milliarder U er nyttig til omkostningsstyring ved at sikre produkthomogenitet, leveringsstabilitet og aktualitet.
5) Batch-til-batch-konsistens: modent proteinekspression og oprensningsplatform ved ISO13485 kvalitetsstyringssystem, kvalitetskontroltest efter kvalitetskrav for at sikre produktstabilitet mellem batch.

5. Relaterede produkter og ydeevne

A. RNase-hæmmer blokerer RNase-aktivitet

1μg HEK-celle total RNA, 1μL RNase-hæmmer kan effektivt hæmme 5ng RNase.

Figur 1. Inhiberende virkning af murin RNase-inhibitor.

B. RNase-hæmmer overgår fremmede produkter i qPCR-test

Den hæmmende virkning af Yeasen og R* Company museafledte RNase-hæmmere (MRI) blev målt ved hjælp af qPCR-teknikken under identiske eksperimentelle omstændigheder, og RNase-hæmmeren fra YEASEN Murine-kilden hæmmede effektivt RNase A i systemet. Virkningen af ​​hæmning var bedre end konkurrenternes.

Figur 2. R* MRI RNase-hæmningstest

Bemærk: Kurverne i figuren fra venstre mod højre er: Positiv kontrol (kun RNA, ingen RNase og MR), 40 E MR, 30 E MR, 20 E MR, 10 E MR og negativ kontrol (RNA + RNase, ingen MR).

Figur 3. Yeasen MRI RNase-hæmningstest

Bemærk: Kurverne i figuren fra venstre mod højre er: Positiv kontrol (kun RNA, ingen RNase og MR), 80 U MRI, 60 U MRI, 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI, Negativ kontrol (RNA+RNase, ingen MRI).

Figur 4. CT af RT-qPCR-resultater af Yeasen MRI og R* MRI

6. Relaterede produkter

De relaterede produkter, som Yeasen kan levere, er vist i tabel 1:

Tabel 1.Liste over produkter

7. Ofte stillede spørgsmål

Q1: Vil der være RNase i den murine RNase-hæmmer?
A: Hvert reagens vil detektere RNase-aktivitet for at sikre, at den murine RNase-hæmmer ikke medfører RNase-kontamination.
Q2: Vil murine RNase-hæmmere have en indvirkning på nedstrøms PCR-eksperimenter?
A: Det vil ikke have nogen effekt. Hver batch af murin RNase-hæmmer er fri for genomisk kontaminering efter kvalitetstestning og kan bruges i RT-PCR- og RT-qPCR-forskning.
Q3: Vil den murine RNase-hæmmer blive inaktiveret?
A: Inhibitorer inaktiveres ved temperaturer over 65°C, og kraftig omrøring vil også forårsage inaktivering.
Spørgsmål 4: Hvilke forholdsregler skal der tages, når man bruger en murin RNase-hæmmer til at forberede reaktionssystemet?
Svar: Ved klargøring af systemet kan der først tilføjes en RNase-hæmmer, før andre komponenter, der kan introducere RNase-kontaminationskilder, tilføjes.
Spørgsmål 5: Har murin RNase-hæmmer endonuklease- og exonukleaseaktivitet?
Svar: Der er ingen endonuklease- og exonukleaseaktivitet, hvilket er med til at forbedre produktudbyttet.

Angående læsning:

Murine RNase-hæmmere ——Eliminerer RNase-kontamination med succes og bevarer RNA

Valg af omvendt transkriptase

YEASEN Varmelabil UDG——Kontroller nemt aerosolforurening

Isotermiske forstærkningsråmaterialer af høj kvalitet - Gør RT-LAMP mere følsom og hurtigere!