Revers transkriptase, også kendt som RNA-afhængig DNA-polymerase, er et DNA-polymeraseenzym, der transskriberer enkeltstrenget RNA til DNA. Ydeevnen af ​​revers transkriptase vil direkte påvirke den endelige ydeevne af molekylære diagnostiske reagenser. Som reaktion på smertepunkterne hos producenter af molekylærdiagnostiske reagenser har Yeasen udført den retningsbestemte transformation på revers transkriptase. Omvendt transkriptase har fremragende ydeevne og bliver godt modtaget af kunderne!

1. Hvad er funktionen af ​​revers transkriptase?
2. Hvordan vælger man revers transkriptase?
3. Hvorfor vælge Yeasens reverse transkriptase?
4. Relaterede produkter og ydeevne
5. Relaterede produkter

1. Hvad er funktionen af ​​revers transkriptase?

Revers transkriptase er en RNA-afhængig DNA-polymerase. Det kan transskribere skabelon-RNA'et og danner komplementært DNA (cDNA). Enkeltstrenget cDNA omdannes til dobbeltstrenget DNA ved hjælp af DNA-polymerase. Så reverse transkriptaser bruges almindeligvis til at kvantificere niveauet af mRNA-syntese, når de kombineres med polymerasekædereaktionsteknikken, kaldet RT-PCR. Kvantitative RT-PCR-assays er almindeligt anvendt til sygdomsdiagnostik. Derfor spiller omvendt transkriptase en vigtig rolle i videnskabelig forskning og praktisk anvendelse.

2. Hvordan vælger man revers transkriptase?

Almindelige reverse transkriptaser er M-MLV og AMV, blandt hvilke M-MLV er bedre end AMV. Men konventionelle RT-enzymer har to aktive steder, et der udfører polymeraseaktiviteterne og et andet der udfører ribonuklease H-aktiviteten. RNase H er en endonuklease, der er i stand til at nedbryde RNA-delen af ​​DNA-RNA-hybridfamilien. Derfor er revers transkriptase, der mangler RNase H-aktivitet, gavnlig for cDNA-syntese. Udover det er brug af en termostabil version af RT gavnlig til at sænke den uspecifikke nukleinsyreamplifikation og minimere virkningen af ​​komplekse sekundære strukturer.

3. Hvorfor vælge Yeasens reverse transkriptase?

Yeasen har udført retningsbestemt modifikation på revers transkriptase, som fjerner RNase H-aktivitet og derved forbedrer evnen til cDNA-syntese. Brug af protein evolution teknologi til at forbedre termostabiliteten af ​​revers transkription.

Yeasens reverse transkriptase har ikke kun en stærk synteseevne, men også en stærk toleranceevne. Yeasen har desuden strenge krav til kvalitet. Det er det bedste valg til revers transkriptase.

4. Relaterede produkter og ydeevne

4.1 Modstandsdygtig over for høje temperaturer på 65°C

Ved anvendelse af 500 ng 293T-celle-total-RNA som skabelon blev revers transkription udført ved 42°C-65°C under anvendelse af Hifair™ Ⅲ Revers Transcriptase. Tag 1 μL cDNA som skabelon for at amplificere TFRC-genet (4,4 kb).

Figur 1. Udfør omvendt transkription ved 42°C-65℃

4.2 Kompatibel med komplekse skabeloner

Reaktionstemperaturen på 55°C kan tilfredsstille den omvendte transkription af konventionelle skabeloner og sekundære strukturskabeloner, og reaktionstemperaturen for skabeloner med høj GC kan passende øges til 65°C.

Figur 2.Velegnet til GC-rige skabeloner og sekundære strukturskabeloner

4.3 Fremragende udvidelsesydelse

Ved at bruge 500 ng totalt RNA fra 293T-celler som skabelon og Oligo(dT) som en primer, blev cDNA syntetiseret under anvendelse af Hifair™ Ⅲ Revers Transcriptase. Tag 1 μL cDNA som skabelon for at amplificere 500 bp af 5' af DY1C1N1-genet (19,9 kb). Resultaterne viste, at Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase kan syntetisere cDNA op til 19,8 kb.

Figur 3. Op til 19,8 kb cDNA kan syntetiseres

4.4 Hurtig syntese

Ved at bruge RNA fra 293T-celler som skabelon blev revers transkription udført i overensstemmelse med standardproceduren i manualen, og revers transkriptionstiden blev indstillet til henholdsvis 5, 10, 15, 30, 45 og 60 minutter. Hifair™ III revers transkriptase kan syntetisere et 6 kb cDNA inden for 5 minutter, og dets specificitet og udbytte er overlegne end V-mærket.

Figur 4. 6 kb cDNA kan syntetiseres inden for 5 minutter

4.5 Bredt lineært område

Ved at bruge 5pg-5μg totalt RNA fra 293T-celler som skabelon blev cDNA syntetiseret ved hjælp af Hifair™ III revers transkriptase. 1 μL cDNA blev brugt som skabelon, og qPCR blev udført på de fire gener, og resultaterne viste, at amplifikationseffektiviteten alle var mellem 98 % og 100,10 %. Det viser, at cDNA effektivt kan syntetiseres i et bredt lineært udvalg af skabeloner.

Figur 5. cDNA kan syntetiseres effektivt i et bredt skabelonområde

4.6 Streng kvalitetskontrol

For at sikre den stabile ydeevne af Yeasens omvendte enzym, implementerer Yeasen strengt kravene i produktionsprocessen for at stabilisere produktionsprocessen og sikre batchstabilitet. Samtidig styrkes kvalitetskontrollen for at påvise rester, herunder exonuklease, nickase, RNase osv. sikre, at der ikke er rester, for ikke at påvirke nedstrømsforsøg.

Figur 6. Restdetektering

5. Relaterede produkter

Produkterne leveret af Yeasen er som følger.

Tabel 1. Relaterede produkter

Angående læsning

Retningslinjen for udvælgelse af omvendt transkriptase

YEASEN UDG: "antibegroningseksperten" i PCR-reaktioner