Lineær PEI 40000, et mere effektivt transfektionsreagens
Generelt er transfektion processen med kunstig at indføre nukleinsyrer (DNA eller RNA) i eukaryote celler. Transfektionsreagenser, som navnet antyder, er en række reagenser involveret i transfektion. Under transfektionsprocessen er vi ofte urolige over den lave transfektionseffektivitet, snævre anvendelsesområde, stærk toksicitet, besværlig drift og dyre pris på transfektionsreagenser. Så er der et transfektionsreagens, der kan løse disse problemer? Ja, lineær PEI er det bedste valg til at løse disse problemer.
Bemærk: Yeasen har lanceret en ny PEI Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV Transfektionsreagens til storstilet produktion af forskellige virusvektorer og forbigående ekspression af proteiner, der er egnede til adhærente og suspensionssystemer.
1. Hvilke typer celletransfektion er der?
2. Hvad er lineær PEI MW 40000?
3. Hvordan virker lineær PEI MW 40000?
4. Hvad er egenskaberne ved PEI MW 40000?
5. Andre transfektionsreagenser fra Yeasen
6. Angående læsning
1. Hvilke typer celletransfektion er der?
Før vi introducerer lineær PEI MW 40000, lad os først kort forstå typerne af celletransfektion. Celletransfektion er af stor betydning for genetisk forskning, proteinforskning og cytologiforskning, som refererer til processen med kunstig indføring af nukleinsyrer (DNA eller RNA) i celler ved hjælp af ikke-virale infektionsmidler. Hovedformålet med transfektion er at studere funktionen af gener eller genprodukter ved at forstærke eller hæmme specifik genekspression i celler eller at producere rekombinante proteiner. Introduktionen af eksogen nukleinsyre vil ændre cellernes egenskaber for at opnå formålet med transfektion, hvilket er nyttigt til studiet af genregulering og proteinekspression, såvel som syntese og produktion af proteiner.
Celletransfektioner kan opdeles ved kemiske, biologiske og fysiske metoder eller opholdstiden for et fremmed gen i cellen. Ved forbigående transfektion kan den indførte nukleinsyre eksistere i cellen i et begrænset tidsrum uden at replikere, mens den indførte nukleinsyre med stabil transfektion integreres i værtsgenomet og kan udtrykkes i afkommet af den transficerede celle.
Med så mange forskellige celletransfektionsmetoder, hvordan vælger man den rigtige metode?
Ingen enkelt transfektionsmetode er egnet til alle celletyper og opfylder alle eksperimentelle behov. Den optimale transfektionsmetode bør vælges i henhold til kravene til celletypen og eksperimentelle forhold.
På nuværende tidspunkt er kemiske transfektionsreagenser stadig de almindelige celletransfektionsmetoder på grund af deres lette betjening og kompatibilitet med en række cellelinjer.
2. Hvad er lineær PEI MW 40000?
Polyethylenimin Lineær (PEI) MW40000 (hurtig lysis) er et transient transfektionsreagens baseret på polyethylenimin med en molekylvægt på 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 er en højt ladet kationisk polymer, der let kan binde negativt ladede nukleinsyremolekyler til dannelse af komplekser og derved indføre komplekser i celler.
Sammenlignet med PEI 25000 transfektionsreagens er PEI 40000 let at opløse og kan opløses direkte i vand. Derudover indeholder PEI 25000 4-11% propionylrester, som forhindrer polymerrygraden i at binde sig til DNA.Men PEI 40000 er en komplet skurkonstruktion, så dens ydeevne er konstant effektiv.
3. Hvordan virker lineær PEI MW 40000?
Polyethylenimin (PEI) er en fremragende multifunktionel ikke-viral vektor med god celleadhæsion og kan bruges til at transficere celler uafhængigt af lysosomale inhibitorer. PEI og DNA er bundet af elektrostatiske kræfter, hvilket får DNA'et til at kollapse fra den løse spirallignende struktur til sfæriske partikelkomplekser. PEI-DNA-komplekserne er normalt positivt ladede til at interagere elektrostatisk med den eksterne cellulære membran og optages af endocytose. De endocytoserede PEI-DNA-komplekser fanges derefter af endosomer til overførsel til lysosomer til nedbrydning. Det stadigt stigende indre iontryk får endosomet til at svulme og briste og frigive fremmed DNA i cytoplasmaet. Denne transfektionsmekanisme kaldes "protonsvamp"-effekt.
Undersøgelser har vist, at PEI-molekyler kan belægge overfladen af PEI-DNA-komplekserne til tilstrækkeligt at beskytte DNA mod at blive nedbrudt af nukleaser i cytoplasmaet, hvilket sikrer transit af det fremmede DNA fra cytoplasmaet til kernen. Desuden kan PEI-molekyler indsætte i phospholipidmembranerne og skabe stabile kanaler til at overføre DNA ind i cellekernen. PEI-molekyler kommer ikke ind i cellekernen og spiller en vigtig rolle som DNA-vektor.
Genekspressionen kan påvises 1-4 dage efter, at det eksogene gen er indført i pattedyrsceller. Dette udtryk skyldes det faktum, at en del af det indførte DNA transskriberes til mRNA efter indtrængen i kernen og derefter translateres til cytoplasmaet. Fordi denne metode er relativt enkel og nem at implementere, ved at vælge en god ekspressionsvektor og transfektionsmetode, kan mængden af proteinekspression nå et højere niveau. PEI-transfektionsreagenserne er blevet brugt i vid udstrækning i videnskabelig forskning og industrielle anvendelser som en almindelig transfektionsmetode til at studere proteinstruktur og funktion.
4. Hvad er egenskaberne ved PEI MW 40000?
Som et forbigående transfektionsreagens med lav cytotoksicitet har PEI 40000 høj transfektionseffektivitet og høj genekspressionseffektivitet i celler såsom HEK293 og CHO. Lineær PEI-transfektionsreagens er blevet valideret for en lang række cellelinjer, herunder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 og Hela-celler. Transfektionseffektiviteten er så høj som 80% ~ 90%. Fortsæt med at se ydeevnedata:
- Høj transfektionseffektivitet, velegnet til adhærente og suspensionsceller
Den er velegnet til en række cellelinjer, herunder HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 og Hela-celler osv., transfektionseffektiviteten er så høj som 80% ~ 90%.
Tabel 1.Liste over validerede cellelinjer
| Adhærente celler (1 μg DNA) | Effektivitet | Suspensionsceller (2 μg DNA) | Effektivitet |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85 % |
| Sf9 | 80%-90% | HEK-293T | 70%-80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70%-80% |
| Hela | 80%-90% |
| |
Figur 2. PEI 40000 transficeret GFP-plasmid ind i adhærente celler HEK-293, transfektionseffektiviteten nåede 90% efter 72 timer (venstre); PEI 40000 transficerede GFP-plasmid i suspensionsceller CHO-K1, og transfektionseffektiviteten nåede 80% efter 72 timer (til højre)
- Lav toksicitet
Det sikrer cellelevedygtighed og forbedrer transfektionseffektiviteten.
Figur 3. PEI 40000 leveret af YEASEN har meget lavere cytotoksicitet end konkurrerende poly**
- Transfektionseffektiviteten er højere end PEI 25000, som fuldstændigt kan erstatte PEI 25000
PEI 25000 indeholder 4-11 % propionylrester, hvilket forhindrer polymerrygraden i at binde til DNA. Sammenlignet med PEI 25000 er PEI 40000 en komplet skurkonstruktion, så dens ydeevne er konstant effektiv.
Figur 4. HEK-293-celler blev transient transficeret med GFP-plasmid under anvendelse af PEI 25000 og PEI 40000 transfektionsreagenser, og fluorescensen blev observeret efter 72 timer. Eksperimentelle resultater: PEI 40000 transfektionseffektivitet er bedre end PEI25000.
- Enkel konfiguration og kort transfektionstid
Dette produkt er en instant type, som kan opløses direkte i vand uden pH-justering. Og kompatibel med serum og antibiotika, ingen grund til at ændre mediet.
- Omkostningseffektiv, velegnet til transient transfektion i stor skala
Sammenlignet med importerede produkter har Yeasen PEI 40000 transfektionsreagens en lav pris og stabile batcher.
5. Andre transfektionsreagenser fra Yeasen
Yeasen har en komplet produktlinje af transfektionsreagenser, inklusive de nuværende almindelige kemiske transfektionsmetoder, kationiske liposomreagenser og kationiske polymerreagenser, som kan anvendes til en række forskellige brugsscenarier. I dette afsnit viser vi alle transfektionsreagenser fra Yeasen og deres anvendelser i følgende tabel, du kan vælge den bedste, der er egnet til dit eksperiment.
Tabel 2.Liste over Yeasen-transfektionsreagenser
| Kat# | Produktnavn | Nukleinsyre type | Celletype |
| 40823ES | DNA | Tilhænger og Suspensionsceller | |
| 40816ES | DNA | Tilhænger og Suspensionsceller | |
| 40820ES | DNA | Tilhænger og Suspensionsceller | |
| 40821ES | DNA | Tilhænger og Suspensionsceller | |
| 40802ES | DNA (<10 kb), shRNA | ENsammenhængende celler | |
| 40805ES | Hieff Trans™ suspension cellefri Liposomal transfektionsreagens (Spørge) | DNA (<10 kb) | Suspensionsceller (For suspenderede blodceller eller immunforsvar celler, transfektionseffektiviteten af nuværende kemiske reagenser er ikke høj. Elektroporation eller virusmetode anbefales.) |
| 40806ES | siRNA、miRNA、præ-miRNA, mimic miRNA, antimiRNA | Adhærente og suspensionsceller |
6. Angående læsning
Transfektionsreagens – Hieff Trans™ og PEI
Vejledning til valg af produkt til in vitro celletransfektionsreagens
Reference:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Dannelse og aggregeringsadfærd af polyethylenimin-DNA-komplekser. Department of Pharmaceutics, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Ny indsigt i mekanismen for polyethylenimin-transfektion og deres implikationer på genterapi og DNA-vacciner. Kolloider og overflader B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Forbigående pattedyrcelletransfektion med polyethylenimin (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ