Etablierung von Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat-Natrium (DSS, Colitis-Grad) induzierte Colitis-assoziierte Krebsmodell

Colitis-assoziierter Krebs (CAC) ist der dritthäufigste bösartige Tumor weltweit. In puncto Morbidität und Mortalität sind sie nach Magen- und Leberkrebs die zweithäufigsten.[1], Entzündliche Darmerkrankungen (IBD) können die Wahrscheinlichkeit erhöhen, an Dickdarmkrebs zu erkranken. Die Kombination von AOM und DSS hat aufgrund ihrer Reproduzierbarkeit, Wirksamkeit, geringen Kosten und Benutzerfreundlichkeit an Popularität gewonnen. Dieser Artikel beschreibt ein Protokoll zur Erstellung eines DSS-AOM-Modells zur Untersuchung der Onkogenese von CACs.

Tiermodell

BALB/c-Mäuse (7 Wochen alt, männlich)

Material

DSS(Yeasen#60316ES,MW36000-50000)、AOM (Yeasen#60751ES)

Lösungsvorbereitung

Mit DSS angereichertes Trinkwasser: Verwenden Sie steriles Wasser, um eine 1–3%ige DSS-Lösung herzustellen. Bis zur Verwendung bei 4 °C lagern.

AOM-Lösung:AOM in WFI lösen, um eine 10 mg/mL Stammlösung zu erhalten. Aliquotieren und bei -20 °C einfrieren. Wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen vermeiden. Am Tag der Verwendung Aliquot auftauen und 1/10 mit steriler Kochsalzlösung verdünnen.

Protokoll

  • Am 1. Tag werden die Mäuse gewogen und markiert. Den Mäusen wird eine 10 mg/kg AOM-Lösung intraperitoneal injiziert.
  • Füllen Sie die Tränke der Mäusekäfige mit Wasser. Rechnen Sie mit 7-10 ml Wasser pro Maus und Tag. Fütterung für eine Woche.
  • Ersetzen Sie das Trinkwasser eine Woche lang durch 2,5 % DSS;
  • Zwei Wochen lang mit normalem Trinkwasser füttern;
  • Wiederholen Sie die Schritte 3–4 dreimal.

Abb. 1. AOM/DSS-Modellierungsprotokoll für Dickdarmkrebs

Ergebnisse eines erfolgreichen CAC-Modells

Gewichtsverlust mit DSS-Behandlung

Abb. 2. Die Veränderung des Körpergewichts von Mäusen

2. Durchfall-Score und Blutungs-Score

Abb. 3. Durchfall Punktzahl und Blutungs-Score

3. Tumorbildung im Dickdarm von Mäusen

Abb. 4. Die repräsentativen gesamten Dickdärme und die Anzahl der Dickdarmkrebs

Abb. 5. Die Proteinexpressionen von COX-2, IL-6, β-Catenin und Snail in Mausmodellen mit akuter Kolitis und Azoxymethan (AOM)/DSS-induziertem kolorektalem Krebs (A) Dickdarmschnitte wurden mit H&E und den angegebenen Antikörpern gefärbt (B) Die Proteinexpression wurde per Western Blot mit den angegebenen Antikörpern untersucht, nachdem Dickdarmgewebe von zwei Mäusen jeder Gruppe lysiert wurde, und β-Tubulin wurde als Ladekontrolle verwendet[2].

Links zu dieser Ressource

[1]Qun Wang et al. Saflorpolysaccharid hemmt AOM/DSS-induzierten Darmkrebs bei Mäusen durch die Regulierung der Makrophagenpolarisation[J].Frontiers in Pharmacology.2021.761641

[2]Jia-Rong Huang et al.Piperlongumin lindert Maus Colitis und Colitis-assoziierte Kolorektaler Darm Krebs[J].Frontiers in Pharmacology.2020.586885

Erfolgreicher Fall für die Modellierung mit Yeasen DSS

Yeasen bietet hochwertige DSS (Kat.-Nr. 60316ES): Reinheit (98%), Schwefelgehalt 17-19%, freier Schwefel <0,2 %, unterstützt durch eine große Anzahl von Literaturdaten.

Tabelle 1 Konstruktion unterschiedlicher Enteritis-Modelle mit DSS

Modell

Modellierungsbeispiele

Modellierungsplan

Modellierungsergebnisse

Auswertung nutzen

akute Kolitis

BALB/c Mäuse, weiblich, 6-8 Wochen, 25 g

3%-5% DSS trinken 7 Tage hintereinander frei

Tag 5 erschien, die Länge des Dickdarms war verkürzt, HE-Färbung und die Entzündung war offensichtlich

Die Formgeschwindigkeit ist schnell und die Zeit kurz. Im Einklang mit den Eigenschaften des akuten Kolitismodells

C57BL/6 Mäuse, männlich, 8 Wochen, 20 g

3–5 % DSS durch Schlundsonde, kontinuierliche Verabreichung

Tag 5 tritt auf, Verkürzung des Dickdarms, Gewichtsverlust, Blut im Stuhl, Durchfall

Hohe Schimmelrate und kurze Dauer. Im Einklang mit den Merkmalen des akuten Kolitismodells

chronische Kolitis

C57BL/6 Maus, männlich, 8 Wochen, 22 g

1-2 % DSS durch Schlundsonde, kontinuierliche Verabreichung

Tag 40 tritt auf, Verkürzung des Dickdarms, Gewichtsverlust, Blut im Stuhl, Durchfall

Hohe Formrate. Im Einklang mit den Eigenschaften des chronischen Kolitismodells

Dickdarmkrebs

C57BL/6 Maus, männlich, 8 Wochen, 21 g

1%-2% DSS ad libitum für 5 Tage für 3 Wochen

14 Wochen mit verkürzter Dickdarmlänge, Gewichtsverlust, HE-Färbung und offensichtlicher Entzündung

Hohe Formungsrate. Im Einklang mit den Eigenschaften des Dickdarmkrebsmodells

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AArtikel NUmber

Spezifikation

Dextransulfat-Natriumsalz (DSS), Colitis-Qualität, MW: 36000–50000

60316ES25/60/76/80

25 g/100 g/500 g/1 kg

Azoxymethan (AOM)

60751ES03/08/10

1 mg/5 mg/10 mg

MolPure® Stuhl-DNA-Kit

18820ES08/50/70

5 T/50 T/200 T

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PVeröffentlichte Artikel mit unseren Reagenzien

  1. Zhong D, Jin K, Wang R, et al. Hydrogel auf Mikroalgenbasis für entzündliche Darmerkrankungen und die damit verbundenen Angstzustände und Depressionen. Adv Mater. 2024 Jan 26:e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. WENN=29,4
  2. Zhang Y, Tu S, Ji X, Wu J, Meng J, Gao J, Shao X, Shi S, Wang G, Qiu J, Zhang Z, Hua C, Zhang Z, Chen S, Zhang L, Zhu SJ. Dubosiella newyorkensis moduliert die Immuntoleranz bei Colitis über den L-Lysin-aktivierten AhR-IDO1-Kyn-Signalweg. Nat Commun. 2024 Feb 13;15(1):1333. doi: 10.1038/s41467-024-45636-x.WENN = 16,6
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  13. Lujuan Xing, Lijuan Fu, Songmin Cao et al. Die entzündungshemmende Wirkung von aus Rinderknochengelatine gewonnenen Peptiden bei durch LPS induzierter RAW264.7 Makrophagenzellen und Dextransulfat-Natrium-induzierte C57BL/6-Mäuse[J]. Nutrients 2022, 14, 1479. WENN=5,717
  14. Wang S,  Huang J,  Bräunen KS, et al. Isosteviolnatrium lindert durch Dextran-Natriumsulfat verursachte chronische Kolitis durch die Regulierung des metabolischen Profilings, der Makrophagenpolarisation und des NF-B-Signalwegs [J]. Oxidative Medizin und zelluläre Langlebigkeit. 2022,4636618. WENN=5,076

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