Was ist ein Sekundärantikörper?
Ein Sekundärantikörper ist ein Antikörper, der an einen Primärantikörper binden kann. Er wird hauptsächlich verwendet, um das Vorhandensein des Primärantikörpers festzustellen. Der Primärantikörper bindet spezifisch an das Antigen und der Sekundärantikörper bindet spezifisch an den Primärantikörper. Mit anderen Worten kann die Fc-Region oder das Fab-Fragment des Primärantikörpers als Antigen wirken, um den Körper zur Produktion von Antikörpern anzuregen. Das heißt, der Primärantikörper besteht hauptsächlich aus Immunglobulinen der IgG-Klasse, sodass der Sekundärantikörper ein Anti-IgG-Antikörper ist.
Die Rolle sekundärer Antikörper
Der primäre Antikörper bindet spezifisch an das Zielprotein und muss mit einer lumineszierenden Substanz oder einer chromogenen Gruppe markiert sein. Mit bloßem Auge ist nicht zu erkennen, ob der primäre Antikörper binden das Protein. Der primäre Antikörper ist jedoch relativ spezifisch und jeder einzelne Antikörper ist mit hohem Aufwand markiert. Üblicherweise wird ein markierter sekundärer Antikörper verwendet, der an den primären Antikörper binden kann und eine nachweisbare Markierung aufweist (wie eine fluoreszierende, radioaktive, chemilumineszierende oder chromogene Gruppe). Das aktuelle Design weist daher im Allgemeinen einen sekundären Antikörper mit einer nachweisbaren Markierung auf, um den primären Antikörper zu erkennen, während der primäre Antikörper das Substrat erkennt. Auf diese Weise kann der primäre Antikörper, wenn er an das Substrat bindet, durch den sekundären Antikörper erkannt werden.
Zum Beispiel das ECL-Lumineszenzprinzip: Im ECL-Substrat befinden sich H2O2 und Luminol (und seine Derivate), die unter der Einwirkung von HRP (Meerrettichperoxidase) Fluoreszenz emittieren.
Wichtige Punkte zur Verwendung von Sekundärantikörpern
Der Sekundärantikörper ist ein Antikörper, der durch Immunisierung von Säugetieren (normalerweise durch Immunisierung von Ziegen, Pferden, Eseln, Maultieren und Meerschweinchen usw.) mit dem Immunglobulin IgG eines bestimmten Subtyps der primären Antikörperart (wie Kaninchen, Mäuse) erzeugt wird, sodass der Sekundärantikörper nur an eine bestimmte Art und einen bestimmten Subtyp des primären Antikörpers bindet. Beispielsweise bindet Schaf-Anti-Maus (Sekundärantikörper) spezifisch an Maus-Monoklonale (Primärantikörper) und nicht an Kaninchen-Polyklonale oder Ratten-Monoklonale.
Kopplungsmarkierungen von Sekundärantikörpern
Verschiedene experimentelle Methoden führen zu unterschiedlichen Kopplungsgruppen für Sekundärantikörper. Dabei handelt es sich hauptsächlich um Enzyme (Meerrettichperoxidase/HRP und alkalische Phosphatase/AP), fluoreszierende Gruppen (FITC, Rhodamin, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3 usw.), Biotin, Goldpartikel usw. Im Allgemeinen werden HRP-markierte Sekundärantikörper für Experimente wie WB, ELISA, IHC und Biotin-markierte Sekundärantikörper für IHC empfohlen, während Fluoreszenzmarkierungen wie Alexa Fluor 488, FITC, PE für IF, FC usw. verwendet werden.
So wählen Sie den richtigen Sekundärantikörper aus
a. Immunblotting (WB)
Wählen Sie für das traditionelle Western Blotting einen mit Meerrettichperoxidase oder alkalischer Phosphatase markierten Sekundärantikörper; wählen Sie für das fluoreszierende Western Blotting einen Sekundärantikörper, der mit dem entsprechenden Fluorophor markiert ist.
b.Immunhistochemie (IHC/ICC)
B. Wählen Sie für die ICC (Immunzytochemie) einen mit Biotin markierten Sekundärantikörper.
C. Immunfluoreszenz (IHF/ICF)
Bei der Immunpräzipitation kann häufig ein sekundärer Antikörper verwendet werden, der entweder Fc- oder Fab-spezifisch ist. Solche sekundären Antikörper können Interferenzen durch die schwere Kette (Molekulargewicht 55 kDa) oder die leichte Kette (Molekulargewicht 25 kDa) vermeiden.
Empfohlene Produktinformationen
| Beschriftungsgruppe | Produktnummer | Produktname |
| Unmarkiert | 34850ES | Ziege Anti-Kaninchen lgG(H+L) |
| 34851ES | Ziegen-Anti-Maus lgG(H+L) | |
| 34847ES | Esel Anti-Human IgG(H+L) | |
| HRP | 33101ES | Peroxidase AfiniPure Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L) |
| 33201ES | Peroxidase AfiniPure Ziege Anti-Maus IgG (H+L) | |
| 33301ES | Peroxidase AfiniPure Ziege Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 33401ES | Peroxidase AfiniPure Ziege Anti-Meerschweinchen IgG(H+L) | |
| 33501ES | Meerrettichperoxidase Ziege Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33701ES | Peroxidase AfiniPure Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33801ES | Peroxidase AfiniPure Kaninchen Anti-Schaf IgG (H+L) | |
| 34201ES | Peroxidase Affinipure Esel Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| 34101ES | Peroxidase AfiniPure Esel Anti-Maus IgG (H+L) | |
| 34301ES | Peroxidase Affinipure Esel Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33101ES | Peroxidase AfiniPure Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| Grüne Fluoreszenz | 33106ES | YSFluor™ 488 Ziege-Anti-Kaninchen-IgG (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 Ziege Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 Ziegen-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 Ziege Anti-Rinder IgG (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 Ziegen-Anti-Meerschweinchen-IgG (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 Kaninchen-Anti-Ziege-IgG (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 Kaninchen-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 Esel Anti-Schaf IgG (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Esel-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 Esel Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 Esel Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 Esel Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 Esel Anti-Meerschweinchen-IgG (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 Esel Anti-Huhn IgG (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 Kaninchen-Anti-Huhn-IgY(H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 Esel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure Ziege Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure Ziege Anti-Maus IgG (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure Ziege Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure Kaninchen Anti-Schaf IgG (H+L) | |
| Rhodamin | 33109ES | Rhodamin (TRITC) Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L) |
| 33209ES | Rhodamin (TRITC) Ziege Anti-Maus IgG (H+L) | |
| 33709ES | Rhodamin (TRITC) Affinipure Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33210ES | Rhodamin Red-X (RRX) Ziege Anti-Maus IgG (H+L) | |
| Orange Fluoreszenz | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure Ziege Anti-Kaninchen IgG (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 Ziege-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 Ziege Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 Ziegen-Anti-Meerschweinchen-IgG (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 Ziege Anti-Rinder IgG (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 Kaninchen-Anti-Schaf-IgG (H+L) | |
| 33912ES | YSFluor™594 Kaninchen-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 Kaninchen-Anti-Huhn-IgY (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Esel-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 Esel Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 Esel Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Esel Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 34512ES | YSFluor™594 Esel Anti-Meerschweinchen-IgG (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 Esel Anti-Huhn IgG (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 Esel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 Esel Anti-Schaf IgG (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure Ziege Anti-Maus IgG (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure Ziege Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure Kaninchen Anti-Schaf IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Esel Anti-Ziege IgG(H+L) | |
| Rote Fluoreszenz | 33113ES | YSFluor™647 Ziege-Anti-Kaninchen-IgG (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 Ziegen-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 Ziege Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 Ziege Anti-Rinder IgG (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 Ziegen-Anti-Meerschweinchen-IgG (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 Kaninchen Anti-Ziege IgG (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 Kaninchen-Anti-Schaf-IgG (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 Kaninchen-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 Kaninchen-Anti-Huhn-IgY (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Esel-Anti-Maus-IgG (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 Esel Anti-Kaninchen IgG (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Esel Anti-Ratte IgG (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 Esel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 Esel Anti-Schaf IgG (H+L) |
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