1. Kernenzymmaterial - Taq DNA-Polymerase

Angesichts der Ausweitung der Anwendungstestfelder und der steigenden Marktnachfrage kann die Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase die Anforderungen nicht mehr vollständig erfüllen. Die Enzymmodifizierungsplattform ZymeEditor™ von Yeasen hat die Taq-DNA-Polymerase umfassend und gezielt modifiziert, um verschiedene Anwendungsanforderungen zu erfüllen, und eine Reihe von Hot-Start-Taq-DNA-Polymerasen auf den Markt gebracht, die für vorgemischte, inhibitorresistente, ultrareine und andere Anwendungen geeignet sind.

• Überlegene Stabilität: Formuliert in einer vollständigen Vormischungslösung, die Primer und Sonden enthält, gibt es nach einer Behandlung bei 37 °C für 7 Tage keine Veränderung bei der Erkennung niedriger Konzentrationen.

Abbildung 1: Unter Verwendung von HBV-Nukleinsäure als Vorlage wurde eine vollständige qPCR-Vormischungslösung mit 10726ES hergestellt, und alle Komponenten außer der Vorlage wurden 7 Tage lang bei 37 °C auf beschleunigte Stabilität getestet. Die Ergebnisse zeigten, dass es bei hohen, mittleren und niedrigen Konzentrationen keine signifikanten Änderungen der Ct-Werte und Fluoreszenzwerte gab, was darauf hindeutet, dass die mit 10726ES hergestellte Vormischungslösung eine stabile Leistung aufweist.

• Geringe gDNA-Rückstände im Wirt: Es sind weniger als 0,5 Kopien der genomischen DNA von E. coli pro 100 U vorhanden.

Abbildung 2: Linearer Bereich genomischer E. coli-DNA: 30 fg/μl bis 300 pg/μl, mit einem Korrelationskoeffizienten R2 von 0,9999. (B) Die verbleibende genomische E. coli-DNA in drei Chargen Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA-Polymerase beträgt weniger als 0,5 Kopien pro 100 U.

2. Kernenzymmaterial - Reverse Transkriptase

Als eine der Schlüsselkomponenten der RT-qPCR-Reaktion muss die Reverse Transkriptase eine schnellere Reverse-Transkriptionsgeschwindigkeit, eine höhere Syntheseausbeute und eine bessere Hitzebeständigkeit aufweisen. Um eine für RT-qPCR besser geeignete Reverse Transkriptase zu erhalten, hat Yeasen Biotech durch genetische Modifikation die Hifair®-Reihe von Reverse-Transkriptasen auf Basis von M-MLV entwickelt.Diese Enzyme zeichnen sich durch eine geringere RNaseH-Aktivität, eine höhere thermische Stabilität und stärkere kontinuierliche Synthesefähigkeiten aus.

• Es hält einer Reaktionstemperatur von 58 °C stand und eignet sich für die Reverse Transkription komplexer RNA-Vorlagen

Abbildung 3: Hifair® V Reverse Transkriptase und die importierte T* Reverse Transkriptase wurden 30 Minuten lang bei 55 °C und 58 °C inkubiert, um die verbleibende Enzymaktivität festzustellen. Die Ergebnisse zeigen, dass Hifair® V Reverse Transkriptase nach 30-minütiger Inkubation bei 58 °C noch 70 % ihrer Aktivität behält und damit die importierte Marke deutlich übertrifft.

• Überlegene Nachweisrate bei RT-qPCR im Vergleich zu anderen Marken mit einem Nachweisbereich von 1 pg bis 1 μg

Abbildung 4: Unter Verwendung von Gesamt-RNA aus 293T-Zellen in Konzentrationen von 1 pg bis 1 μg (7 Gradienten) als Vorlage wurde die Reverse Transkription mit Hifair® V One-Step RT-gDNA Digestion SuperMix für qPCR (Cat#11142), V* und T* durchgeführt. Die resultierende cDNA wurde dann zur quantitativen Analyse einer qPCR unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Empfindlichkeit von 11142ES 1 pg erreichen kann, wobei die Nachweisrate der von Konkurrenzprodukten überlegen ist.

3. Andere Enzyme und Enzyminhibitoren: RNase-Inhibitor, UDG-Enzym

Yeasen Biotech bietet eine Vielzahl von Enzymen und Enzyminhibitoren an, die für IVD-Industrieanwendungen validiert wurden, darunter RNase-Inhibitoren und UDG-Enzyme, und bietet damit eine reichhaltige Auswahl an hochwertigen Rohstofflösungen für die Entwicklung und Produktion einer breiten Palette von In-vitro-Diagnostika. Diese enzymbezogenen Produkte werden häufig zum Schutz von Zielprodukten für die molekulare Erkennung verwendet.

RNase Hemmstoff:Yeasen exprimiert und reinigt rekombinante Maus-/Schweine-RNase-Inhibitoren in einer löslichen Form in E. coli, die verschiedene Arten von RNasen (RNase A, B, C) breit hemmen können, ohne die Aktivität von Polymerasen zu unterdrücken. Diese Inhibitoren wurden für den weit verbreiteten Einsatz in mehreren Anwendungen wie RT-PCR/qPCR, RNA-seq, cDNA-Klonierung und Bibliotheksaufbau validiert. Zusätzlich zu herkömmlichen RNase-Inhibitoren hat Yeasen auch RNase-Inhibitoren entwickelt, die mit der UCF.ME®-Technologie mit ultraniedrigen Rückständen verarbeitet werden, weniger Wirtsrückstände aufweisen und für Anwendungen mit strengeren Anforderungen an Hintergrundbakterien geeignet sind, wodurch sie zur Beseitigung bakterieller Hintergrundinterferenzen bei der Krankheitserregererkennung beitragen und die Genauigkeit der Erkennung verbessern.

Uracil-DNA-Glykosylase (UDG/UNG-Enzym):Uracil-DNA-Glykosylase (UDG-Enzym) kann in Verbindung mit dUTP ein PCR-Kontaminationspräventionssystem aufbauen. Yishengs thermolabiles Enzym mit niedrigem UDG-Gehalt kann die Restaktivität herkömmlicher UDG-Enzyme nach der Inaktivierung vermeiden, die bei Raumtemperatur zum Abbau dU-haltiger Amplifikationsprodukte führen kann. Es verhindert auch falsch positive PCR-Ergebnisse, die durch in molekularen Enzymen vorhandene Hintergrundbakterien verursacht werden. Dies ist entscheidend für die genaue Identifizierung infektiöser Krankheitserreger und unterstützt die klinische Diagnose von Infektionen und Infektionskrankheiten.

Taq-DNA-Polymerase-Antikörper:Unspezifische Amplifikation ist eines der Hauptprobleme, das die Leistung der PCR erheblich beeinträchtigt, und die Hot-Start-Technologie kann unspezifische Amplifikation wirksam reduzieren. Das mit Antikörpern modifizierte Hot-Start-Enzym weist eine hohe Versiegelungseffizienz und hervorragende Leistung auf, ist bei Raumtemperatur stabil und weist eine schnelle Freisetzungsrate der Enzymaktivität auf.Das von Yisheng Biotech entwickelte Dual-Antikörper-Hot-Start-Taq-Enzym versiegelt nicht nur die 5'→3'-Polymeraseaktivität des Taq-Enzyms, sondern gleichzeitig auch die 5'→3'-Exonukleaseaktivität. Dieser duale Ansatz verhindert effektiv eine durch Fehlpaarung oder Primerdimere verursachte unspezifische Amplifikation und verhindert auch die Entstehung unspezifischer Signale aufgrund des Abbaus von Sonden oder Primern, wodurch die Stabilität der Reagenzien doppelt erhöht wird.

4. Universeller Hochleistungs-qPCR-Mastermix für ein Röhrchen

Yeasen Biotech bietet hochwertige qPCR-Reagenzien mit leistungsstarker Hot-Start-Taq-Polymerase gepaart mit einem optimierten Puffersystem. Das Unternehmen bietet eine Reihe von Produkten an, darunter Universal-Mastermixe, All-in-One-Mastermixe, Genotypisierungs-Mastermixe und gefriergetrocknete Mastermixe. Diese Reagenzien zeichnen sich durch ihre Benutzerfreundlichkeit, hohe Empfindlichkeit und starke Stabilität aus, was die Entwicklung Ihrer molekulardiagnostischen Produkte beschleunigt.

• gute Vielseitigkeit：Es ist für mehrere Arten von Primern und Sonden geeignet (mehr als 40 verschiedene Arten von Zielen wurden verifiziert) und verfügt über eine ausgezeichnete Amplifikationsleistung;
• m Super volle Premix-Stabilität: 14 Tage bei 37 °C, 28 Tage bei 4 °C stabil, 50-maliges Einfrieren und Auftauen;

• Hohe Sensitivität und gute Spezifität: die Empfindlichkeit kann 0,25 Kopien/μL erkennen und die Spezifität von 48 Löchern weist keinen negativen Peak auf;
• Schnelles Support-Programm:kompatibel mit Schnellprogramm, 30 Minuten können Ergebnisse liefern;
• dUP/UDG-Antiverschmutzungssystem: Zur wirksamen Verhinderung von Aerosolverschmutzung wird das dUTP/UDG-Antiverschmutzungssystem eingeführt;
• Multiplattform- und Multisystem-Anwendung: Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong usw.

Abbildung 5: Basierend auf der Stabilitätsstudie des All-in-One-Vormischreagenz wurde 16710ES auf drei verschiedene Arten behandelt (4 °C, 37 °C und Gefrier-Auftau-Zyklen). Die Versuchsgruppen wurden 7 Tage lang bei 4 °C bzw. 37 °C behandelt und 50 Gefrier-Auftau-Zyklen unterzogen, während die Kontrollgruppe (bei -20 °C gelagert) auf Stabilität unter vier Multiplex-Amplifikationssystemen untersucht wurde (Gruppen 1, 2 und 4 sind Quadruplex-Amplifikationssysteme und Gruppe 3 ist ein Triplex-Amplifikationssystem). Die Ergebnisse zeigten, dass die Abweichung der Ct-Werte (ΔCt) zwischen den Versuchs- und Kontrollgruppen innerhalb von ±0,5 lag und die Abweichung der Fluoreszenzwerte innerhalb von 15 % lag, was beweist, dass das All-in-One-Vormischreagenz von Yeasen eine ausgezeichnete Stabilität bei der Multiplex-Amplifikation besitzt.

5. Universeller Hochleistungs-RT-qPCR-Mastermix

Einstufige RT-qPCR-Reagenzien vereinen die überlegene Leistung von Reverser Transkriptase und Hot-Start-Enzymen, ergänzt durch ein optimiertes Puffersystem, das eine schnelle und empfindliche Erkennung von einstelligen Kopievorlagen ermöglicht. Diese Reagenzien wurden in verschiedenen Kundenmärkten, darunter Atemwegserkrankungen, Tierseuchen und Forschungssysteme, validiert und können die Anforderungen verschiedener Anwendungsbereiche erfüllen.

• gute Vielseitigkeit：Es eignet sich für die qPCR-Amplifikation und Erkennung von Nukleinsäuren pathogener Mikroorganismen, menschlicher Genome, Pflanzen und anderer Arten;
• Hohe Empfindlichkeit：Das sorgfältig optimierte Puffersystem verbessert die Nachweisempfindlichkeit von Vorlagen mit niedriger Konzentration auf bis zu 250 Kopien/ml;
• dUP/UDG-Anti-Verschmutzungssystem：Das dUTP/Hitzelabile UDG-Anti-Verschmutzungssystem wird eingeführt, um die Aerosolverschmutzung von Produkten effizient abzubauen, falsch-positive Ergebnisse zu reduzieren und authentische Ergebnisse sicherzustellen;
• Schnelles Support-Programm: kompatibel mit Schnellprogramm, 40 Minuten können Ergebnisse liefern;
• Super Stabilität: 14 Tage lang bei 37 °C haltbar, 10-maliges Einfrieren und Auftauen wiederholt.

Bewertung der Nachweisempfindlichkeit

Abbildung 6: Unter Verwendung des RT-qPCR-Premix (16630ES) von Yeasen und eines vergleichbaren Produkts von Lieferant-A wurde die Erkennung von vier Krankheitserregern gleichzeitig durchgeführt (Humanes Parainfluenzavirus HPIV2, Humanes Parainfluenzavirus HPIV4, Respiratorisches Synzytialvirus HRVA und Rhinovirus RSVA). Die Ergebnisse zeigten, dass die Erkennungsempfindlichkeit von 16630ES höher war als die von Lieferant-A.

Produktempfehlung

产品类型	产品名称	Rezension
PCR-Enzymserie	Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA-Polymerase, 5 U/μL	10726ES
	Hifair® V Reverse Transkriptase (200 U/μL)	11300ES
	Uracil-DNA-Glykosylase (UDG/UNG), hitzelabil, 1 U/μL	10303ES
	Muriner RNase-Inhibitor (40 U/µL)	10603ES
	dNTP-Mix (je 25 mM)	10125ES
Ultra-saubere PCR-Einzelenzymserie mit ultra-niedrigen Wirtsrückständen	Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA-Polymerase (5 U/μL)	14314ES
	Hifair UCF.ME® V Reverse Transkriptase (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Uracil-DNA-Glykosylase (UDG/UNG), hitzelabil, 1 U/μL	14466ES
	UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (40 U/µL)	14672ES
Lyo-Ready PCR-Monoenzymserie	Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA-Polymerase, Glycerin-frei (5U/μL)	14316ES
	Hifair® V Reverse Transkriptase, Glycerin-frei (600 U/μL)	11301ES
	Uracil-DNA-Glykosylase (UDG), hitzelabil (1 U/μL, Glycerin-frei)	10707ES
	Murine RNase Inhibitor (200 U/µL, Glycerin-frei)	10703ES
RT-qPCR Mastermix	Hifair® C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR-Sondenkit (UDG Plus)	16630ES
	Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR-Sondenkit (UDG Plus)	11899ES
	Hifair® Lyo Multiplex Ein-Schritt-RT-qPCR-Kit	11831ES
qPCR Mastermix	Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix (ein Röhrchen)	16710ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	13891ES
	Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11827ES
	Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix (UDG plus)	11853ES
	Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)	11893ES