HiActi™ In kultivierten Organoiden validierte Zytokine

Im Jahr 2021 werden Organoide als Schlüsselprojekt des nationalen Forschungs- und Entwicklungsplans „14. Fünfjahresplan“ aufgeführt. Organoide sind so angesagt, und auch die Art und Weise, wie sie gewonnen werden, ist in den Mittelpunkt der Aufmerksamkeit gerückt. Verschiedene Organoide erfordern während der Kultivierung unterschiedliche Zytokine. Durch Zugabe von Zytokinen, die bestimmte Signalwege fördern oder hemmen, können Stammzellen dazu gebracht werden, sich in die gewünschten Organoide zu differenzieren. Das klassischste Zytokin-Kulturprotokoll in der Organoid-Kultur ist WNER (jeweils: Wnt-3a, Noggin, EGF und R-Spondine), und die zunehmende oder abnehmende Kombination dieser 4 Faktoren kann auf fast alle Organoid-Kulturexperimente angewendet werden.

In der Organoidkultur häufig verwendete Zytokine

R-Spodin 1

Funktion: R-Spodin 1 gehört zur Rspo-Familie der Wnt-Regulatoren, die aus 4 Mitgliedern besteht, nämlich Rspo1-4. Diese Familie ist ein mikroökologischer Faktor, der adulte Stammzellen in mehreren Organen erhält. RSPO1 ist ein sezerniertes Aktivatorprotein. Rspo-1 wird in bestimmten Regionen des sich entwickelnden zentralen Nervensystems exprimiert und kommt auch in der Nebenniere, dem Eierstock, den Hoden, der Schilddrüse und der Luftröhre vor.

Als Aktivator des Wnt-Signalwegs spielt Rspo1 in vielen Aspekten eine Rolle, indem es die Wnt-Signalgebung verstärkt. Es ist ein häufig verwendetes Wachstumsmedium für Magenepithel-Organoide, Dünndarm- und Dickdarm-Organoide, Leber-Organoide, Prostata-Organoide, Pankreas-Organoide und Brust-Organoide. Faktor.

Wnt-3a

Funktion: Wnt-3a gehört zur Wnt-Familie der Signalproteine ​​und spielt eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung der Integrität embryonaler und erwachsener Gewebe. Die Wnt-Familie ist hochkonserviert und reich an Cystein. Wnts vermitteln den Wnt-Signalweg, indem sie an Zellmembranrezeptoren und/oder an benachbarte Zellmembranrezeptoren binden. Der Wnt-Signalweg kann in einen kanonischen und einen nichtkanonischen Signalweg unterteilt werden. Einer ist am kanonischen Signalweg beteiligt, der durch β-Catenin vermittelt wird, einschließlich Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b und Wnt10a; der andere ist kein nichtkanonischer Signalweg, der von β-Catenin abhängig ist, einschließlich Wnt4, Wnt5a, Wnt6 und Wnt11. Als repräsentativstes Signalprotein der Wnt-Familie ist Wnt3a weit verbreitet und spielt eine Schlüsselrolle bei der Regulierung pleiotroper Zellfunktionen, einschließlich Selbsterneuerung, Proliferation, Differenzierung und Motilität.

EGF

Funktion: EGF ist ein starker Wachstumsfaktor, der die Entwicklung mehrerer Epithelzellen, Angiogenese, Hemmung der Magensäuresekretion, Fibroblastenproliferation und Koloniebildung epidermaler Zellen in Kultur stimuliert. EGF ist ein Gründungsmitglied der EGF-Familie, zu der auch TGF-α, zwei regulatorische Proteine ​​(AR), β-Zellprotein (BTC), epidermales Protein (EPR), heparinbindender EGF-ähnlicher Wachstumsfaktor (HB-EGF), Epiproteine ​​und Neureguline (NRG1-6) gehören. Physiologisch kommt EGF in verschiedenen Körperflüssigkeiten vor, darunter Blut, Milch, Urin, Speichel, Sperma, Pankreassaft, Zerebrospinalflüssigkeit und Fruchtwasser. EGF ist ein Ligand mit hoher Affinität für den EGF-Rezeptor (ErbB). EGF bindet und induziert die Dimerisierung des EGF-Rezeptors, was zur Aktivierung des Protein-Tyrosin-Kinase-Signalwegs führt und so das Signal der EGF-Familie überträgt.

Kopf

Funktion: Noggin kann Liganden der TGF-β-Familie hemmen und ihre Bindung an entsprechende Rezeptoren verhindern.Noggin wurde ursprünglich als Antagonist von BMP-4 entdeckt und moduliert nachweislich die Aktivität anderer BMPs (BMP-2, 7, 13 und 14). Noggin ist bei Wirbeltieren stark konserviert. Sekretierte Noggin-Proteine ​​regulieren die Aktivität von Knochenmorphogenetischen Proteinen während der Entwicklung. Rolle des BMP-Signalantagonisten Noggin bei der Entwicklung osteolytischer Knochenmetastasen bei Prostatakrebs.

bFGF/FGF-2

Funktion: bFGF, ein Mitglied der FGF-Superfamilie mitogener Proteine. Es ist ein hochspezifischer chemotaktischer und mitogener Faktor für viele Zelltypen und scheint an der Umgestaltung geschädigter Gewebe beteiligt zu sein, beispielsweise bei der Heilung von Geschwüren, der Reparatur von Gefäßen und traumatischen Hirnverletzungen. bFGF ist ein wichtiger Bestandteil des Kulturmediums menschlicher embryonaler Stammzellen. Darüber hinaus ist das bFGF-Protein ein heparinbindendes kationisches Protein, das an verschiedenen pathologischen Zuständen beteiligt ist, darunter Angiogenese und das Wachstum solider Tumore. Daher gilt bFGF als Ziel für Krebschemoprävention und therapeutische Strategien. bFGF wird häufig als wichtiger Bestandteil von Zellkulturmedien verwendet, beispielsweise Kulturmedium menschlicher embryonaler Stammzellen und serumfreie Kultursysteme.

FGF-10

Funktion: Fibroblasten-Wachstumsfaktor 10 (FGF-10) ist ein Heparin-bindender Wachstumsfaktor, der zur FGF-Familie gehört. Proteine ​​dieser Familie spielen eine zentrale Rolle bei der pränatalen Entwicklung, dem postnatalen Wachstum und der Regeneration verschiedener Gewebe, indem sie die Zellproliferation und -differenzierung fördern. FGF-10 wird von mesenchymalen Zellen abgesondert und bindet an extrazelluläres FGF-BP, FGF-10 bindet und aktiviert bevorzugt epithelialen FGF R2 (IIIb) und interagiert schwach mit FGF R1 (IIIb).

QQualitätsmanagementsystem von HiActi™ Zytokin

Qualitätsmanagementsystem

• Die nach ISO 13485:2016 zertifizierten Zytokine werden in einem vollständig geschlossenen, ultrareinen Produktionsprozess hergestellt, um die Sauberkeit und Stabilität der Proteine ​​zu gewährleisten.
• Einhaltung des Systems der „Guten Herstellungspraxis für Arzneimittel“
• Besitzen Sie ein Qualitätszertifikat (COA)
• Aseptische Technologie und sekundäre Sterilisationsfiltration
• Produktionsbasis für pharmazeutische Rohstoffe

Qualitätssicherungsmanagement

• Eine spezielle Person ist für das Schulungssystem des Managementpersonals verantwortlich
• Legen Sie Verfahren für die Wartung und Kalibrierung der Geräte fest
• Rohstoff- und Lieferantenmanagementsystem
• Führen Sie vollständige Chargenproduktionsaufzeichnungen, Chargenprüfaufzeichnungen, Verpackungsaufzeichnungen usw. durch.
• Die Aufzeichnungen der Qualitätsdokumente wurden von der Qualitätssicherung geprüft und kontrolliert.
• Lückenlose Chargenproduktions- und Prüfprotokolle
• Validierung analytischer Methoden

Qualitätskontrollsystem

• Einhaltung der dritten allgemeinen Regel der Ausgabe 2020 des Arzneibuchs der Volksrepublik China: Qualitätskontrolle von Rohstoffen und Hilfsstoffen für die Herstellung biologischer Produkte

Validierung der Organoidkultur

Yeasen Zytokine wurden an menschlichen Tumor-Organoiden wie Lungenkrebs, Gebärmutterhalskrebs, Eierstockkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs und Darmkrebs sowie an normalen Organoiden wie Dünndarm-Organoiden von Menschen und Mäusen nachgewiesen.

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