Hintergrundbeschreibung

Bei der Proteinreinigung wird das Zielprotein von den Gesamtproteinen in der Versuchsprobe isoliert, wobei die biologische Aktivität und chemische Integrität des Zielproteins erhalten bleiben. Bei der Konstruktion von Vektoren müssen neben einigen notwendigen Expressionselementen auch die Codon-Optimierung und die Wahl der Tags berücksichtigt werden. Die Wahl des richtigen Tags ist nicht nur für die Proteinreinigung und die Förderung der Proteinlöslichkeit von Vorteil, sondern sollte auch die Struktur und Funktion des Proteins und nachgelagerte Anwendungen nicht beeinträchtigen. Dieser Abschnitt konzentriert sich auf die Einführung von His- und GST-Tags.

Tabelle 1. Einführung zu His und GST-Tags

Etikett	Größe kDa	Sequenz	Reinheit	Löslichkeit	Tag-Entfernung	Tag-Spaltungsenzym
Sein	~0,84	HHHHHH	+	+	Nicht erforderlich	TEV-Protease
Mehrwertsteuer	26	Bestehend aus 211 Aminosäuren	++	++	Erforderlich	3C Protease/PSP

His-Tag-Protein-Affinitätsreinigung

HisSep Ni-NTA Agarose-Harz basiert auf hochvernetztem Agarosegel als Matrix, chemisch gekoppelt mit tetrakoordinierter Nitrilotriessigsäure (NTA) als Ligand und nach Chelatisierung von Nickelionen (Ni²⁺), bildet es eine sehr stabile oktaedrische Struktur mit Nickelionen im Zentrum des Oktaeders. Diese Struktur kann Nickelionen vor Angriffen durch kleine Moleküle schützen. Im Vergleich zu Ni-IDA-Harz ist es stabiler und kann bestimmten Konzentrationen von Reduktionsmitteln, Denaturierungsmitteln oder Kupplungsmitteln unter rauen Bedingungen standhalten. Im Vergleich zu Ni-TED-Harz hat es eine größere Adsorptionskapazität für Zielproteine. Es ist zu einem der unverzichtbaren Harze für die Reinigung von His-markierten Proteinen in Laboren geworden.

Abbildung 1. Das Produktprinzipdiagramm von His-Harz.

Tabelle 2. Yeasen Sein Leitfaden zur Auswahl von Reinigungsprodukten

Produktnummer	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Produktname	HisSep Ni-NTA Agarose-Harz	HisSep Ni-NTA Agaroseharz 6FF	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatographiesäule, 5 ml / 1 ml	HisSep Ni-NTA MagBeads
Matrix	Vernetztes 6% Agarosegel	Hochvernetztes 6% Agarosegel	Hochvernetztes 6% Agarosegel	Magnetische Agarose-Mikrokügelchen
Druckbeständigkeit	0,1 MPa, 1 Bar	0,3 MPa, 3 Bar	0.3 MPa, 3 Bar	N / A
Kapazität	＞40 mg 6×His-markiertes Protein/ml Matrix	＞40 mg 6×His-markiertes Protein/ml Matrix		> 40 mg 6×His-markiertes Protein/ml Magnetkügelchen
Reinigungsvorschlag	Matrix mit mittlerer Druckbeständigkeit, geeignet für Inkubationsverfahren, Schwerkraftsäulenreinigung im kleinen Maßstab	Matrix mit hoher Druckbeständigkeit, kann für die industrielle Proteinreinigung im großen Maßstab mit Proteinreinigungsinstrumenten verwendet werden		Schnelle und bequeme Proteinreinigung durch magnetische Trennung
Toleranz	8 M Harnstoff, 6 M Salzsäure, 0,5–1 mM DTT, 1 mM EDTA usw.
Anwendung	His-markierte Proteinreinigung ist die erste Wahl, hohe Belastung, durchschnittliche Toleranz, besonders geeignet für prokaryotische Expressionsreinigungssysteme

Anhang: Produktmerkmale der HisSep Ni-NTA MagBeads (Kat.-Nr. 20561ES).

1. Im Vergleich zu herkömmlichen vorgepackten Säulen und Harzen ist keine mehrfache Zentrifugation der Proben und keine Kontrolle der Probenflussrate erforderlich, wodurch die Reinigungszeit erheblich verkürzt wird.
2. Durch eine einstufige Reinigung kann eine Reinheit von über 95 % des Zielproteins erreicht werden.
3. Hohe Zielproteinausbeute: Die Ausbeute kann 70–80 % erreichen.
4. Kann bis zu 5 Mal wiederverwendet werden.
5. Konzentration und Volumen des Zielproteins lassen sich einfach anpassen.
6. Geringer Proteinverlust und kein Risiko einer Proteindenaturierung oder -fällung.

GST-Tag-Protein-Affinitätsreinigungsmedium

Die GST-Tag-Protein-Affinitätschromatographie nutzt die kovalente Affinität zwischen GST-Fusionsprotein und fixiertem Glutathion (GSH) durch Schwefelbindungen und reinigt basierend auf dem Prinzip der GSH-Austauschelution. Bei dieser Reinigung wird ein Glutathion durch eine Schwefelbindung mit dem Arm des Gels kombiniert, und dann wird die spezifische Wirkungskraft zwischen Glutathion und Glutathion-S-Transferase (d. h. GST-Tag) genutzt, um das GST-markierte Fusionsprotein mit dem Arm-Glutathion auf dem Gel zu kombinieren, wodurch das markierte Protein von anderen Proteinen getrennt wird. Glutathion liegt normalerweise in oxidierter Form GSSG und in reduzierter Form GSH vor. Wenn wir GSH-Elution verwenden, konkurriert GSH mit dem Glutathion des Gels um die Kombination mit dem Fusionsprotein, wodurch das Zielprotein eluiert wird.

GSTSep Glutathion-Agarose-Harz ist ein GST-Tag-Proteinreinigungsharz, das strukturell durch chemische kovalente Kombination von reduziertem Glutathion mit 6 % Agarosegel als Matrix über einen 12-Atom-Arm hergestellt wird. Dieses Design hat die Reinigungseffizienz des Harzes erheblich verbessert und ermöglicht es, mehr als 20 mg GST-Fusionsprotein pro Milliliter Medium zu transportieren. Das Produkt weist eine gute Spezifität und ein gutes Preis-Leistungs-Verhältnis auf und kann verwendet werden, um verschiedene Glutathion-S-Transferasen, glutathionabhängige Proteine ​​und rekombinante Glutathion-Derivate in einem Schritt zu reinigen.

Tabelle 3. Yeasen Leitfaden zur Produktauswahl für GST-Reinigungsgeräte

Produktnummer	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Produktname	GSTSep Glutathion-Agarose-Harz	GSTSep Glutathion-Agarose-Harz 4FF	GSTSep Glutathion 4FF Chromatographiesäule, 1 ml / 5 ml	GSTSep Glutathion MagBeads
Matrix	Vernetztes 6% Agarosegel	Hochvernetztes 4% Agarosegel	Hochvernetztes 4% Agarosegel	Magnetische Agarose-Mikrokügelchen
Druckbeständigkeit	0,1 MPa, 1 Bar	0,3 MPa, 3 Bar	0,3 MPa, 3 Bar	N / A
Kapazität	>20 mg GST-Protein (40 kDa)/ml Matrix	>10 mg GST-Protein (40 kDa)/ml Matrix		5–10 mg GST-Tag-Fusionsprotein/ml Magnetkügelchen
Anwendung	Hohe Belastung, Matrix mit mittlerer Druckbeständigkeit, geeignet für Inkubationsmethoden, Schwerkraftsäulenreinigung im kleinen Maßstab, empfohlen für Kunden im Labormaßstab	Anwendung Geringe Belastung, hohe Matrixdruckbeständigkeit, kann für die industrielle Proteinreinigung im großen Maßstab mit Proteinreinigungsinstrumenten verwendet werden, einfacher zu skalieren		Geringste Belastung, schnelle und bequeme Proteinreinigung durch magnetische Trennung

Anhang: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) Produktmerkmale

1. Reinigen Sie hochreine Zielproteine ​​direkt aus biologischen Proben durch magnetische Trennung in einem Schritt. Dies vereinfacht den Reinigungsprozess erheblich und verbessert die Reinigungseffizienz. Geeignet für die bequeme Reinigung von GST-Fusionsproteinen in der wissenschaftlichen Forschung und in der Industrie.
2. Bei Verwendung dieser magnetischen Perle für GST-Pulldown-Experimente ist der Vorgang im Vergleich zu herkömmlichen Chromatographiemethoden einfacher, schneller und automatisierter, da für die magnetische Trennung keine mehrfache Zentrifugation und keine langen Inkubationszeiten erforderlich sind.

Produktinformationen

Produktpositionierung	Produktname	Produktnummer	Spezifikation
His-Tag-Protein-Reinigung	HisSep Ni-NTA Agarose Harz	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA Agarose Harz 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatographiesäule, 5 ml	20504ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	HisSep Ni-NTA 6FF Chromatographiesäule, 1 ml	20505ES03/08	1 ml/5 x 1 ml
	HisSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5 ml/25 ml
GST-Tag-Proteinreinigung	GSTSep Glutathion-Agarose-Harz	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	GSTSep Glutathion-Agarose-Harz 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	GSTSep Glutathion 4FF Chromatographiesäule, 1 ml	20509ES03/08	1 ml/5 x 1 ml
	GSTSep Glutathion 4FF Chromatographiesäule, 5 ml	20510ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	GSTSep Glutathion MagBeads	20561ES08/25	5 ml/25 ml