Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-Polymerase ist eine neue Generation von hochpräzise DNA Polymerase basierend auf Pfu DNA Polymerase. Die Hieff Canace^TM Die hochpräzise Uracil+-DNA-Polymerase ermöglicht schnelle und präzise PCR-Reaktionen für komplexe Vorlagen. Ihre Präzision ist deutlich verbessert und Amplifikationsfehler, die durch die Verwendung von dUTP-haltigen Primern/Vorlagen/dNTPs verursacht werden, werden vollständig vermieden. Das Produkt ist mit einem optimierten Enzympuffer und zusätzlichen PCR-verstärkenden Komponenten ausgestattet, wodurch das Enzym hocheffizient und an eine Vielzahl von Vorlagen anpassbar ist und sich für die Amplifikation komplexer Vorlagen eignet.

Produktkomponenten

Versand und Lagerung

Die Komponenten werden mit Kühlakkus versendet und können 1 Jahr bei -20°C gelagert werden.

Produktanwendung

Hochpräzise Bibliotheksamplifikation durch Verwendung von dUTP-haltigen Primern/Vorlagen/dNTPs.

Vorsichtsmaßnahmen

1. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit bei Operationen bitte Laborkittel und Einweghandschuhe.

2. Nur für Forschungszwecke!

Anweisungen

Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA-Polymerase wird etwas anders verwendet als herkömmliche High-Fidelity-Enzyme. Bitte lesen Sie die Anweisungen vor der Verwendung sorgfältig durch.

1. Empfohlenes Reaktionssystem

Alle Operationen sollten auf Eis durchgeführt werden. 2×Canace^TM Der Uracil+ PCR-Puffer sollte nach dem Auftauen gut gemischt werden. Vor der Systemkonfiguration heizen Sie das PCR-Gerät bitte vor. Nach der Zugabe der Komponenten mischen Sie die Probe mit einer Pipette gut und zentrifugieren sie bis zum Boden des Röhrchens. Geben Sie sie dann zur Amplifikation in das vorgeheizte PCR-Gerät. Nach Gebrauch lagern Sie alle Komponenten wieder bei -20 °C.

Tabelle 1. PCR-Amplifikationsreaktion

[Anmerkungen]:

1) Reagenzien: Tauen Sie jede Komponente vor der Verwendung ausreichend auf.

2) Vorlagen: Die Verwendung gereinigter, hochwertiger DNA-Vorlagen kann die Effizienz und Erfolgsrate der Amplifikation erheblich verbessern.

3) dNTPs: Die empfohlene endgültige dNTP-Konzentration beträgt 200 μM. Die im Kit enthaltenen dNTPs enthalten kein dUTP. Wenn besondere Umstände die Herstellung von dUTP-haltigen Vorlagen erfordern, kann zusätzliches dUTP bis zu einer Endkonzentration von 400 μM hinzugefügt werden.

4)Polymerasekonzentration: 1 U/50 μL wird empfohlen. Sie kann zwischen 0,5 und 2 U/50 μL optimiert werden, sollte aber 2 U/50 μL nicht überschreiten. Um zu verhindern, dass Polymerase Primer aufgrund der 3'→5'-Exonuklidaktivität abbaut, wird empfohlen, dem Reaktionssystem im letzten Schritt Polymerase hinzuzufügen.

5) Mg2+-Endkonzentration: Die Endkonzentration des Systems beträgt 2 mM. Bitte fragen Sie unser Unternehmen nach Puffern mit niedriger Mg2+-Konzentration oder ohne Mg2+, wenn Sie spezielle Anforderungen haben.

2. Empfohlenes Reaktionsprozedere

Tabelle 2. Verfahren zur PCR-Amplifikationsreaktion

[Anmerkungen]:

1) Anfängliche Denaturierungstemperatur und -zeit: 98 °C werden empfohlen. Die empfohlene Zeit beträgt 30 Sekunden für einfache Vorlagen wie Plasmid-DNA, 1 Minute für Bibliotheken, 3 Minuten für komplexe Vorlagen wie cDNA und genomische DNA und 5-10 Minuten für Vorlagen mit hohem GC-Gehalt.

2) Annealing-Temperatur und -Zeit: 60 °C werden empfohlen, oder es kann ein Temperaturgradient eingestellt werden, um je nach Bedarf die optimale Temperatur für das Primer-Annealing zu finden. Die empfohlene Annealing-Zeit beträgt 20 Sekunden und kann innerhalb von 10-30 Sekunden angepasst werden. Eine zu lange Annealing-Zeit kann zur Dispersion der amplifizierten Produkte auf dem Gel führen.

3) Verlängerungstemperatur und -zeit: 72 °C werden empfohlen. Die Verlängerungszeit wird entsprechend dem tatsächlichen Bedarf angepasst.