Beschreibung
Produktbeschreibung
2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (mit Farbstoff) ist eine gebrauchsfertige 2× vorgemischte Lösung mit Hieff Canace™ Plus hochpräzise DNA-Polymerase, dNTPs und ein optimiertes Puffersystem. Die Mischung enthält zwei monoklonale Antikörper, die die Polymeraseaktivität und die 3'→5'-Exonukleaseaktivität bei Raumtemperatur hemmen und so eine hochspezifische Hot-Start-PCR ermöglichen. Die Zugabe von Verlängerungsfaktoren ermöglicht die Amplifikation langer Fragmente mit Zielfragmenten bis zu 13 kb. Dieses Enzym weist 5'→3'-DNA-Polymeraseaktivität und 3'→5'-Exonukleaseaktivität auf, mit einer Genauigkeit, die 83-mal höher ist als die der Taq-DNA-Polymerase und 9-mal höher als die der gewöhnlichen Pfu-DNA-Polymerase. Es eignet sich zur Amplifikation komplexer Vorlagen und zur Herstellung von PCR-Produkten mit stumpfen Enden.
2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (mit Farbstoff) bietet Vorteile wie Einfachheit, hohe Empfindlichkeit, starke Spezifität und hervorragende Stabilität. Das Reaktionssystem erfordert lediglich die Zugabe von Primern und Vorlagen, und ein zweistufiges PCR-Protokoll kann verwendet werden, um das Verfahren zu vereinfachen und Zeit zu sparen. Das Produkt enthält einen Elektrophorese-Tracking-Farbstoff, der das direkte Laden von PCR-Produkten für die Gelanalyse ermöglicht. Darüber hinaus enthält es ein spezielles Schutzmittel, das auch nach wiederholten Gefrier-Auftau-Zyklen eine stabile Aktivität gewährleistet.
Technische Daten
| Kat.NO. | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
| Größe | 100 μL / 1 ml / 5×1 ml / 100×1 ml |
Lagerung
Dieses Produkt sollte bei -25~-15℃ gelagert werden für 1 Jahre.
Anweisungen
1. Empfohlene PCR-Reaktionssysteme.
| Komponenten | Volumen（μL） | Finale Konzentration |
| 2× Hieff Canace™ Plus PCR-Mastermix (mit Farbstoff)* | 25 | 1× |
| Vorlage*** | X | - |
| Nach vorne Primer（10 μmol/L）** | 2 | 0.4 μmol/L |
| Reverse Primer（10 μmol/L）** | 2 | 0,4 μmol/L |
| ddH2O | Bis zu 50 | - |
*Die 1× Endkonzentration der Mischung enthält 1 U/50 μL Polymerase, 2 mmol/L Mg2+und 200 μmol/L dNTPs.
**Die empfohlene Endkonzentration der Primer in der PCR-Reaktion beträgt 0,2-1 μmol/L, vorzugsweise 0,4 μmol/L.
***Empfohlene Vorlagenmengen für ein 25 μL Reaktionssystem:
| Vorlagentyp | Fragmentgröße (1 kb-10 kb) |
| Genomische DNA | 50 ng-200 ng |
| Plasmid- oder Virus-DNA | 10 pg-20 ng |
| cDNA | 1–2,5 μL (nicht mehr als 1/10 des gesamten PCR-Volumens) |
2. Reaktionsprogramm.
1)Zwei-Stufen-Protokoll (bevorzugt):
| Zyklus Schritt | Temp. | Zeit | Zyklen |
| Erste Denaturierung | 98℃ | 3 Min | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek. | 30-35 |
| Verlängerung | 68℃ | 30 Sek./kB | |
| Final tErweiterung | 72℃ | 5 Min | 1 |
2)Drei-Stufen-Protokoll (konventionell):
| Zyklus Schritt | Temp. | Zeit | Zyklen |
| Erste Denaturierung* | 98℃ | 3 Min | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek. | 30-35 |
| Glühen** | 60℃ | 20 Sek | |
| Verlängerung*** | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Final tErweiterung | 72℃ | 5 Min | 1 |
*Erste Denaturierung: Empfohlen bei 98 °C für 3 Minuten (5–10 Minuten für Vorlagen mit hohem GC-Gehalt).
**Annealing: Empfohlen bei 60 °C für 20 Sekunden (einstellbar zwischen 10 und 30 Sekunden). Längeres Annealing kann zu Schmierereien auf Gelen führen.
***Erweiterung: Empfohlen bei 72 °C für 30 Sek./kb (bis zu 60 Sek./kb für komplexe Vorlagen).
3)Gradient Annealing-Protokoll (empfohlen für schwierige Ziele):
| Zyklus Schritt | Temp. | Zeit | Zyklen |
| Erste Denaturierung | 98℃ | 3 Min | 1 |
| Denaturierung | 98℃ | 10 Sek. | 15 (Abnahme um 1°C pro Zyklus) |
| Gradientenglühen | 70-55°C | 20 Sek | |
| Verlängerung | 72℃ | 30 Sek./KB | |
| Denaturierung | 98°C | 10 Sek. | 20 |
| Glühen | 55°C | 20 Sek. | |
| Verlängerung | 72°C | 30 Sek./KB | |
| Final tErweiterung | 72℃ | 5 Min | 1 |
4)Merkmale verschiedener PCR-Protokolle:
| Protokolltyp | Geschwindigkeit | Spezifität | PCR-Ausbeute | Erkennungsrate |
| Zweistufig | Am schnellsten | Hoch | Medium | Hoch |
| Dreistufiger | Medium | Medium | Höchste | Medium |
| Gradientenglühen | Langsam | Hoch | Medium | Hoch |
Hinweise
1.Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte operieren Sie mit Laborkittel und Einweghandschuhen，zu Ihrer Sicherheit.
Zahlung und Sicherheit
Ihre Zahlungsinformationen werden sicher verarbeitet. Wir speichern weder Kreditkartendaten noch Zugriff auf Ihre Kreditkarteninformationen.
Anfrage
Sie können auch mögen
FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
Für bestimmte Anwendungen sind möglicherweise zusätzliche geistige Eigentumsrechte Dritter erforderlich.