Beschreibung
Dieses Kit kann eine PCR-Amplifikation von Mausgewebe (wie Mäuseschwanz, Mäuseohr, Mäusezehe, Muskeln usw.) direkt und schnell durchführen und weist eine hohe Probenkompatibilität auf. Ausgestattet mit einem leistungsstarken Lysepuffer kann dieses Kit Proben schnell lysieren und genomische DNA freisetzen. Das Lysat kann ohne Reinigung direkt zum PCR-Reaktionssystem hinzugefügt werden, und die Bedienung ist bequem. Darüber hinaus erfordert dieses Kit nur eine geringe Probeneingabe und 5 mg Mäusegewebe oder 1–5 mm Mäuseschwanz können für Experimente verwendet werden.
Der in diesem Kit enthaltene 2× Mouse Direct PCR Mix ist eine Hot-Start-PCR-Reaktionslösung mit 2-facher Konzentration. Er enthält alle für die PCR-Amplifikation verwendeten Komponenten außer der Vorlage und den Primern, was den Vorgang erheblich vereinfacht und das Kontaminationsrisiko verringert. Das Kit kann zur Transgenidentifizierung, zur Genotypisierung von Mäusen usw. verwendet werden.
Merkmale
- Weniger Probenmenge erforderlich: 5 mg Mäusegewebe oder 1-5 mm Mäuseschwanz
- Bequeme Vorlagenvorbereitung: kein Mahlen erforderlich, keine Verfeinerung und Reinigung der DNA erforderlich, höherer Fluss, Zeit- und Geldersparnis
- Optimiertes PCR-System: mit höherer Spezifität und stärkerer Toleranz gegenüber PCR-Reaktionsinhibitoren
Anwendungen
- Identifizierung transgener Mäuse
- Genotypisierung von Mäusen
- Gen-Knockout-Analyse bei Mäusen
Technische Daten
| Produktspezifikation | Bausatz |
| Heißer Start | Eingebauter Hot Start |
| Transportbedingungen | Eisbeutel |
| Produkttyp | Direktes PCR-Kit |
| Anwenden Zu (Anwendung) | Mäuseschwanz, Mäuseohr, Rattenzehe, Eingeweide, Haut usw. |
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Puffer ML | 5×1 ml | 20×1 ml |
| 10185-B | Puffer MT | 0,6 ml | 2×1,25 ml |
| 10185-C | 2× Maus-Direkt-PCR-Mix | 500 μL | 2×1 ml |
- a) Puffer ML ist ein Lysepuffer mit starken Proteindenaturierungsmitteln. Bitte tragen Sie Handschuhe.
- b) Puffer MT ist ein Stopppuffer, der verwendet wird, um die Lysefunktion von Puffer ML zu stoppen.
- c) 2× Mouse Direct PCR Mix: Enthält Hot-Start-Taq-DNA-Polymerase, dNTP-Mix, MgCl2, Reaktionspuffer, PCR-Reaktionsverstärker, Optimierer, Stabilisator, Elektrophorese-Indikatorfarbstoff usw.
Lagerung
- Komponente A: Das Produkt sollte kann ein Jahr lang bei 2°C bis 8°C gelagert werden. Bei Mehrfachverwendung über einen längeren Zeitraum vermeiden Sie bitte Kreuzkontamination.
- Komponente B/C: Das Produkt sollte gespeichert werden bei-25℃ ~ -15℃ für ein Jahr. Bitte vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.
Zahlen
1. Zielgen (innerhalb von 1 kb) Amplifikationsergebnis
Abbildung 1.Geeignet für die Zielgenamplifikation innerhalb von 1 kb.
2. Die Erweiterungsgeschwindigkeitsdemonstration
Abbildung 2. 500-bp-Gen, die Verlängerungsgeschwindigkeit kann bis zu 1 Sek./kb betragen.
Zitiert aus „TFPI ist ein Kolon-Kryptarezeptor für TcdB aus dem hypervirulenten Clade 2 von C. difficile. Cell . 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010.“
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI ist ein Kolon-Krypt-Rezeptor für TcdB aus dem hypervirulenten Klade 2 C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Bruton-Tyrosinkinase reguliert Makrophagen-induzierte Entzündungen in der diabetischen Niere über die Aktivierung des NLRP3-Inflammasoms. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Häufiges Problem | Mögliche Ursache | Lösung |
| In der Positivkontrolle und den zu testenden Proben waren keine Banden vorhanden. | Das PCR-Reaktionssystem oder die Reaktionsbedingungen waren nicht geeignet. | Verwenden Sie die Gradienten-PCR, um die optimalen Reaktionsbedingungen für die PCR zu ermitteln. |
| Durch unsachgemäße Lagerung gehen PCR-Reagenzien verloren. | 2× Mouse Direct PCR Mix sollte bei -20 °C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen während der Verwendung sollte vermieden werden. Bei häufigem Gebrauch kann es für kurze Zeit bei 4 °C gelagert werden. | |
| Probleme beim Primer-Design. | Versuchen Sie zur Überprüfung, die Primer neu zu gestalten. | |
| Die positive Kontrolle weist ein interessierendes Band auf und die zu testende Probe weist kein oder ein schwaches Band auf. | Unsachgemäße oder längere Lagerung kann zum Verlust der Reagenzaktivität führen. | Verwenden Sie frische Reagenzien. |
| Geben Sie eine große Menge Gewebelysat hinzu. | Erhöhen Sie das Reaktionssystem oder reduzieren Sie die Lysatmenge. | |
| Das Probenlysegemisch wurde unsachgemäß oder zu lange gelagert und das DNA-Genom wurde zerstört. | Die Lysatmischung kann 2–3 Tage bei 4 °C gelagert werden.Versuchen Sie, für die PCR eine frisch zubereitete Lysatmischung zu verwenden. | |
| Die Menge der hinzugefügten Vorlage ist nicht geeignet. | Die Menge der zugegebenen Vorlage wurde im Bereich von 1–10 % des Reaktionssystems optimiert. | |
| Unzureichende Anzahl an PCR-Zyklen. | Erhöhen Sie die Anzahl der PCR-Zyklen, vorzugsweise auf 35-40 Zyklen. Aufgrund der Komplexität der Vorlage sollten PCR-Reaktionen mit 5-10 Zyklen mehr durchgeführt werden als mit gereinigter DNA-Vorlage. | |
| Unspezifische Amplifikation | PCR-Annealingtemperatur zu niedrig, Zykluszahl, Primerkonzentration oder Templatekonzentration zu hoch. | Erhöhen Sie die PCR-Annealing-Temperatur und verringern Sie die PCR-Zyklenzahl, Primer-Konzentration oder Template-Konzentration. |
| Fehlpaarungen der PCR-Primer. | PCR-Primer neu gestalten. | |
| Bei der Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems ist die Temperatur zu hoch oder es vergeht zu viel Zeit nach Abschluss der Vorbereitung. | Die Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems erfolgt bei niedriger Temperatur und die PCR-Amplifikationsreaktion wird so bald wie möglich nach Abschluss der Vorbereitung durchgeführt. | |
| Zielband erscheint in der Negativkontrolle | Kontamination von Operationsinstrumenten oder Reagenzien. | Alle Reagenzien und Geräte im Experiment sollten autoklaviert werden. Gehen Sie beim Umgang vorsichtig und behutsam vor, um zu verhindern, dass die Zielsequenz in die Probenpistole gesaugt oder aus dem Zentrifugenröhrchen verschüttet wird. |
| Kreuzkontamination zwischen Proben. | Jeder Probenehmer wird nur für eine Probe verwendet; oder tauchen Sie nach der Entnahme einer Probe den Rand des Probenehmers in eine 2%ige Natriumhypochloritlösung, spülen Sie ihn mehrmals durch und trocknen Sie die Rückstände anschließend mit einem sauberen Papiertuch ab. |
Zahlung und Sicherheit
Ihre Zahlungsinformationen werden sicher verarbeitet. Wir speichern weder Kreditkartendaten noch Zugriff auf Ihre Kreditkarteninformationen.
Anfrage
Sie können auch mögen
FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
Für bestimmte Anwendungen sind möglicherweise zusätzliche geistige Eigentumsrechte Dritter erforderlich.