Beschreibung
Das direkte PCR-Kit für Pflanzengewebe ist ein Kit, das verschiedene Arten von Pflanzenblättern direkt durch PCR amplifizieren kann, mit breiter Anpassungsfähigkeit und starker Stabilität. Das Kit verwendet ein einzigartiges Lysepuffersystem, das eine Vielzahl von Pflanzenproben schnell lysieren und genomische DNA freisetzen kann. Die freigesetzte genomische DNA kann direkt als Vorlage verwendet werden, ohne dass Protein, RNA oder sekundäre Metaboliten in der PCR-Reaktion entfernt werden müssen. Darüber hinaus erfordert das Kit eine kleine Probenmenge; für Experimente können bereits 1 mm große Pflanzenblätter verwendet werden.
Der in diesem Kit enthaltene 2×Plant Master Mix ist stark amplifikationskompatibel und kann das Lysat der Probe direkt als Vorlage für eine effiziente und spezifische Amplifikation verwenden. Dieses Reagenz ist ein 2-fach konzentriertes PCR-Reaktionsgemisch, das alle für die PCR-Amplifikation verwendeten Komponenten außer der Vorlage und den Primern enthält, was den Vorgang erheblich vereinfacht und die Kontaminationsgefahr verringert.
Das Kit kann zur Identifizierung gentechnisch veränderter Pflanzen, zur Pflanzengenotypisierung usw. verwendet werden.
Versand
Der Versand der Produkte erfolgt mit Kühlakkus.
Lagerung
1. Reagenz 10187-A [Puffer P1] kann 1 Jahr lang bei 4 °C gelagert werden.
2. Reagenz 10187-B [Puffer P2], wird zum Neutralisieren von Lysat verwendet, was für eine längere Lagerung der Probe von Vorteil ist und bei 4 °C 1 Jahr lang gelagert werden kann.
3. Reagenz 10187-C [2× Plant Master Mix] kann 1 Jahr lang bei -20 °C gelagert werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.
Vorsichtsmaßnahmen
1. Bei Blattexperimenten wird empfohlen, frisch gesammeltes Blattgewebe zu verwenden. Wenn es sich um ein langfristig gefrorenes Gewebe handelt, muss es bei -80 °C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen sollte so weit wie möglich vermieden werden, um einen Abbau der Vorlage und eine Beeinträchtigung der PCR-Effizienz zu vermeiden. Das Blattgewebe ist für junge Blätter geeignet. Wenn es sich um ein reifes Blatt handelt, vermeiden Sie die Verwendung des Gewebes der Hauptader des Blattes.
2. Für eine optimale Amplifikationseffizienz wird empfohlen, das Fragment auf eine Länge von 1 kb zu amplifizieren.
3. Verwenden Sie bei der Probenentnahme einen Locher oder ein Messer, um eine Probe geeigneter Größe zu entnehmen. Wenn die Proben unterschiedlich sind, muss der Locher oder das Messer vor jeder Probenverarbeitung gereinigt werden.
4. Für Blattgewebe wird empfohlen, Blätter von 1–10 mm Länge zu nehmen. Eine zu geringe Blattlänge führt zu einer geringen PCR-Amplifikationsausbeute, eine zu große Blattlänge hemmt die PCR-Reaktion. Verwenden Sie zur Behandlung von Pflanzenblättern die Methode des thermischen Crackens, Zerstampfens mit einer Pipettenspitze und Zerkleinerns mit einer Mühle. Nach der Behandlung muss es geschüttelt und zentrifugiert werden. Nehmen Sie unbedingt den Überstand zum Testen. Niederschlag hemmt die PCR-Reaktion erheblich.
5. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit bei Operationen bitte Laborkittel und Einweghandschuhe.
6. Dieses Produkt ist NUR für Forschungszwecke bestimmt!
| Häufige Probleme | Mögliche Ursachen | Lösungen |
| In der Positivkontrolle und den zu testenden Proben waren keine Banden vorhanden. | Das PCR-Reaktionssystem oder die Reaktionsbedingungen waren nicht geeignet. | Verwenden Sie die Gradienten-PCR, um die optimalen Reaktionsbedingungen für die PCR zu ermitteln. |
| Eine unsachgemäße Lagerung der PCR-Reagenzien führt zu deren Inaktivierung. | 2×PCR-Mix sollte bei -20 °C gelagert werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen bei der Verwendung. Bei häufigem Gebrauch kann es für kurze Zeit bei 4 °C gelagert werden. | |
| Probleme beim Primer-Design. | Versuchen Sie zur Überprüfung, die Primer neu zu gestalten. | |
| Die positive Kontrolle weist ein interessierendes Band auf und die zu testende Probe weist kein oder ein schwaches Band auf. | Das Verhältnis von Lyse-Puffer und Neutralisationspuffer ist ungeeignet und das Lyse-Gemisch beeinflusst den pH-Wert des PCR-Systems. | Unter normalen Bedingungen sollte der pH-Wert der neutralisierten Lysemischung bei etwa 7–8 liegen (das Lyseprodukt und der Puffer P2 sollten streng im Verhältnis 5:1 neutralisiert werden). |
| Das Probenlysegemisch wurde unsachgemäß oder zu lange gelagert und das DNA-Genom wurde zerstört. | Die Lysatmischung kann 5 Tage lang bei 4 °C gelagert werden. Versuchen Sie, für die PCR eine frisch zubereitete Lysatmischung zu verwenden. | |
| Die Menge der hinzugefügten Vorlage ist nicht geeignet. | Optimieren Sie die Menge der hinzugefügten Vorlage im Bereich von <5 % des Reaktionssystems. | |
| Unzureichende Anzahl an PCR-Zyklen. | Erhöhen Sie die Anzahl der PCR-Zyklen entsprechend, vorzugsweise auf 35–40 Zyklen. Aufgrund der Komplexität der Vorlage ist es im Allgemeinen besser, 5–10 weitere PCR-Reaktionszyklen durchzuführen, als eine gereinigte DNA-Vorlage zu verwenden. | |
| Unspezifische Amplifikation | PCR-Annealingtemperatur zu niedrig, Zykluszahl, Primerkonzentration oder Templatekonzentration zu hoch. | Erhöhen Sie die PCR-Annealing-Temperatur und verringern Sie die PCR-Zykluszahl, Primer-Konzentration oder Template-Konzentration. |
| Fehlpaarung der PCR-Primer. | PCR-Primer neu gestalten. | |
| Bei der Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems ist die Temperatur zu hoch oder die angegebene Zeitspanne nach der Vorbereitung ist zu lang. | Die Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems erfolgt bei niedriger Temperatur und die PCR-Amplifikationsreaktion wird so bald wie möglich nach Abschluss der Vorbereitung durchgeführt. | |
| Zielband erscheint in der Negativkontrolle | Kontamination von Operationsinstrumenten oder Reagenzien. | Alle Reagenzien oder Geräte im Experiment sollten autoklaviert werden.Gehen Sie beim Umgang vorsichtig und behutsam vor, um zu verhindern, dass die Zielsequenz in die Probenpistole gesaugt wird oder aus dem Zentrifugenröhrchen ausläuft. |
| Kreuzkontamination zwischen Proben. | Jeder Probenehmer wird nur für eine Probe verwendet; oder tauchen Sie die Probenehmerklinge nach der Entnahme einer Probe in eine 2 %ige Natriumhypochloritlösung, spülen Sie sie wiederholt ab und trocknen Sie die Rückstände anschließend mit einem sauberen Papiertuch. |
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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