Beschreibung
Das Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit ist ein Kit, das Vollblutproben ohne DNA-Reinigung oder Probenvorbehandlung direkt amplifizieren kann und mit frischem Blut, gekühltem (gefrorenem) Blut und handelsüblichen getrockneten Blutflecken kompatibel ist, die herkömmliche Antikoagulanzien wie EDTA, Heparin, Citrat usw. enthalten. Das Kit enthält eine gentechnisch veränderte DNA-Polymerase-Kombination mit hoher Wiedergabetreue und Resistenz gegenüber PCR-Inhibitoren, 2× Hieff® Blood Advanced PCR-Puffer mit starkem Elongationsfaktor, Amplifikationsverstärkungsfaktor und optimiertem Puffersystem, um 8 kb genomischer Fragmente unter schnellen Verlängerungsbedingungen effizient zu amplifizieren und eine Verlängerungszeit von 3–5 Sek./kb für Fragmente unter 2 kb festzulegen, wodurch die Zeit zur Identifizierung und Prüfung der Blutprobe erheblich verkürzt wird.
Technische Daten
| Treue (vs. Taq) | 1 × |
| Heißstart | Ja |
| Überhang | 3'-A |
| Polymerase | Taq DNA-Polymerase (Kat.: 10726) |
Komponenten
| NEIN. | Name | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Blut-PCR-Puffer | 500 μM | 2,5 ml |
| 10188-B | Hieff® Fortschrittlicher DNA-Polymerase-Mix mit hoher Genauigkeit | 20 μM | 100 μl |
| 10188-C | Positiver Kontrollprimer-Mix (jeweils 10 μM) | 100 μl | 200 μl |
| 10188-D | 10× DNA-Ladepuffer | 1 ml | 1 ml |
Anweisungen
Empfohlene PCR-Reaktionssysteme.
| Komponenten | Volumen (μL) |
| ddH2O | bis 50 μL |
| 2× Hieff® Blut-PCR-Puffer | 25 μl |
| Vorwärtsprimer (10 μM) | 2 μL |
| Rückwärtsprimer (10 μM) | 2 μL |
| Hieff® Fortschrittlicher DNA-Polymerase-Mix mit hoher Genauigkeit | 1 μl |
| Blutprobe | X |
2. Eine Endkonzentration von 0,4 μM pro Primer wird empfohlen, eine zu hohe Konzentration führt zu einer unspezifischen Amplifikation.
3. Die optimale Konzentration der Vollblutvorlage liegt zwischen 0,5 % und 20 %, und die empfohlene Verwendung beträgt 10 % als anfängliche Versuchsbedingung, d. h. 5 μl Vollblut werden als Vorlage zum 50 μl-Reaktionssystem hinzugefügt, wobei darauf zu achten ist, dass keine Blutgerinnsel angesaugt werden. Für getrocknete Blutflecken, die auf Whatman®-Filterkarten gespeichert sind, können etwa 1 mm2 runde Papierstücke mit Blutflecken entnommen und ohne Vorbehandlung direkt in die PCR-Reaktion amplifiziert werden.
Reaktionsprogramm
| Zyklus Schritt | Temperatur. | Zeit | Zyklen |
| Erste Denaturierung | 95℃ | 5 Minuten | 1 |
| Denaturierung | 95℃ | 15 Sek. | 30-35 |
| Glühen | 60℃ | 15 Sek. | |
| Verlängerung | 72℃ | 3–10 Sek./KB | |
| Finale Verlängerung | 72℃ | 5 Minuten | 1 |
Die Annealing-Temperatur ist ein allgemeiner Tm-Wert oder liegt 1-2 °C unter dem Tm-Wert des Primers. Wenn das Amplifikationsprodukt weniger spezifisch ist, kann ein Annealing-Temperaturgradient eingerichtet werden, um optimale Annealing-Bedingungen zu finden.
Eine Verlängerungszeit von 10 Sek./kb kann die meisten Zielfragmente unter 8 kb amplifizieren, und 3-5 Sek./kb können die meisten Fragmente unter 2 kb amplifizieren. Wenn die Amplifikationseffizienz niedrig ist, kann die Zeit angemessen auf 20-30 Sek./kb verlängert werden und sollte 60 Sek./kb nicht überschreiten.
Versand und Lagerung
Die Produkte sollten bei -15℃ gelagert werden ~ -25℃ für 1 Jahr
Zahlen
Hinweise
1. Es wird empfohlen, 10 % des gesamten Reaktionsvolumens als Blutvorlage zu verwenden, d. h., dem 50-μL-Reaktionssystem werden 5 μL Vollblut als Vorlage hinzugefügt. Dabei ist darauf zu achten, dass keine Blutgerinnsel angesaugt werden.
2. Eine Verlängerungszeit von 10 Sek./kb kann die meisten Zielfragmente unter 8 KB amplifizieren, und 3-5 Sek./kb können die meisten Fragmente unter 2 KB amplifizieren. Wenn die Amplifikationseffizienz gering ist, kann die Zeit auf 30 Sek./kb verlängert werden.
3. Nach der PCR-Reaktion wird empfohlen, das Reaktionsprodukt 1–3 Minuten lang bei 4000 U/min (1000 × g) zu zentrifugieren, um Blutzellfragmente auszufällen, und das Überstand für eine nachfolgende Analyse zu verwenden.
4. Dieses Produkt kann nicht direkt zur medizinischen Diagnose verwendet werden.
5. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit bitte einen Laborkittel und Einweghandschuhe.
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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