S-Adenosylmethionin (S-Adenosylmethionin, SAM) ist ein Hilfssubstrat, das an der Methyltransferreaktion beteiligt ist und im Körper bei der Synthese aus Adenosintriphosphat und Methionin in der Methioninadenosyltransferase besteht. SAM wird in einer Lösung aus 10 mM HCl, 10 % Ethanol und pH 4 bei 25 °C hergestellt. Dieses Produkt wird nach GMP-Prozessanforderungen hergestellt und in flüssiger Form bereitgestellt.

Merkmale

• Validierte, produktspezifische Prozesse und Analysemethoden
• Produktspezifische Stabilität
• Die Dokumentation erfolgt gemäß den geltenden GMP-Richtlinien
• AOF-Produktionsprozess und Rohstoffe (TSE & BSE)
• Nitrosamin-Erklärung
• Regulatorische Unterstützungsdokumente verfügbar
• Großserienproduktion

Anwendungen

• Enzymatischer Capping-Prozess für mRNA-Impfstoffe und Therapeutika
• Enzymatische Methylierungen von Biopolymeren

Technische Daten

CAS-Nr.	485-80-3
Formel	C15H23N6O5S+
Molekulargewicht	399,44 g/mol
Reinheit (HPLC)	＞ 90 %
Inhalt	32 mM ± 2 mM
Zusammensetzung (1X)	10 mM HCl, 10 % Ethanol pH 4 bei 25 °C
Struktur

Komponenten

Versand und Lagerung

Das Produkt wird mit Trockeneis versendet und kann ein Jahr lang bei -15 °C bis -25 °C gelagert werden.

Zahlen

• Reinheitsbewertung

Abbildung 1. Die Reinheit (HPLC) des SAM-Produkts kann über 98 % liegen (Abbildung 1A) und die optische Reinheit (ee, %) der (S, S)-SAM-Isoform liegt immer bei etwa 70 % (Abbildung 1B).

• Nachweis von Enzymrückständen

Abbildung 2. Durch Agarosegelelektrophorese wurden keine Enzymrückstände nachgewiesen.

Eine 20-µl-Reaktion im Puffer, der 500 ng Hind III-Verdau von λDNA und 2 µl S-Adenosylmethionin (SAM) enthält und 4 Stunden bei 37 °C inkubiert wurde, ergibt bei der Agarosegelelektrophorese keinen Unterschied im Vergleich zur Kontrolle (freies SAM im Reaktionssystem) (Abbildung 2A).Eine 20-µl-Reaktion im Puffer, der 500 ng pUC19-Plasmid und 2 µl S-Adenosylmethionin (SAM) enthält und 4 Stunden lang bei 37 °C inkubiert wurde, ergibt bei der Agarosegelelektrophorese keinen Unterschied im Vergleich zur Kontrolle (SAM-frei im Reaktionssystem) (Abbildung 2B).

• Funktionstest und Verifizierung

Abbildung 3: Die Capping-Effizienz der posttranskriptionellen Capping-Reaktion von YEASEN könnte bei nahe 99 % liegen.

Eine 20-µl-Reaktion im Puffer, der 1 µg λDNA, 1 Einheit M. SssI (CpG-Methyltransferase) und 160 µM S-Adenosylmethionin (SAM) enthält, wird 1 Stunde lang bei 37 °C inkubiert. Die resultierende DNA ist resistent gegen die Verdauung mit BstUI, wie durch Agarose-Gelelektrophorese bestimmt wurde (Abbildung 3A). 10 μg RNAs wurden durch Inkubation bei 65 °C für 5 Minuten vor dem Capping denaturiert. Eine 20-µl-posttranskriptionelle Capping-Reaktion wurde vorbereitet und 2 Stunden lang bei 37 °C in einer PCR-Maschine inkubiert. Die Transkripte wurden mit magnetischen Kügelchen (Kat.-Nr. 12602) gereinigt. Anschließend wird die Capping-Effizienz durch LC-MS nachgewiesen (Abbildung 3B).