Beschreibung
Dieses Produkt ist eine Bakteriophagen-T7-RNA-Polymerase, die aus rekombinanter Proteinexpression in Escherichia coli gewonnen wurde. Sie katalysiert die 5'→3'-Synthese von RNA auf doppelsträngiger DNA ausgehend von ihrer T7-Promotorsequenz (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') und verwendet NTPs als Substrate. DNA mit doppelsträngigen linearen stumpfen Enden oder 5'-überstehenden Enden kann als Template für die T7-RNA-Polymerase verwendet werden. Linearisierte Plasmide und PCR-Produkte können daher als Template für In-vitro-Reaktionen verwendet werden. Synthese von RNA.
Hinweis: G* ist die erste Base des RNA-Transkripts.
Dieses Produkt wird gemäß den GMP-Vorschriften hergestellt und in flüssiger Form bereitgestellt.
Besonderheit
- Synthetisieren Sie lange und kurze Transkripte. RNA kann mit 1 μg DNA-Vorlage in 100-200 μg produziert werden.
- Höhere Ausbeute und einfache Bedienung
- Weniger Endotoxine
- Getestet auf das Fehlen von Endonukleasen, Exonukleasen, RNasen
Anwendung
- Vorbereitung radioaktiv markierter RNA-Sonden
- RNA-Generierung für Studien zur RNA-Struktur, -Verarbeitung und -Katalyse
- Expressionskontrolle über Antisense-RNA
- mRNA-, sgRNA-Synthese
Spezifikation
| Quelle | Ausgedrückt in E. coli mit einem rekombinanten T7-RNA-Polymerase-Gen |
| Optimale Temperatur | 37℃ |
| Speicherpuffer | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) Glycerin, pH 7,9 bei 25℃ |
| Einheitendefinition | Die Enzymmenge, die benötigt wird, um 1 nmol [3H] GMP innerhalb einer Stunde bei 37°C und einem pH-Wert von 8,0 in den säureunlöslichen Niederschlag einzubauen wird als 1 Einheit definiert. |
Qualität
| COA-Artikel | Standard |
| Aktivität | 250–300 U/µl |
| Protein Konzentration | ≥0,5 mg/ml |
| Reinheit | ≥95 % |
| Endotoxin | <20 EU/mg |
| Restprotease | Negativ |
| Restliche Exonuklease | Negativ |
| Restnickase | Negativ |
| Restliche RNase | Negativ |
| E. coli-Wirtsprotein | <50 ppm |
| E.coli-Wirt DNA | <10 fg/Einheiten |
| Mykoplasmen DNA | Negativ |
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2.500 KU) | 10625ES99 (100 MU) |
| 10625 | T7 RNA-Polymerase, GMP-Qualität (250 U/μL) | 40 μL | 400 μl | 10 ml | 400 ml |
Versand und Lagerung
T7-RNA-Polymerase-Produkte in GMP-Qualität werden mit Trockeneis versendet und können ein Jahr lang bei -15 °C bis -25 °C gelagert werden.
Zahlen
Abbildung 1. Standard-RNA wurde in vitro mithilfe des T7-RNA-Synthesekits synthetisiert.
Die Reaktion wurde 2 Stunden lang bei 37 °C in einem PCR-Gerät inkubiert und anschließend mit Magnetkügelchen (Kat.-Nr. 12602) gereinigt. Das Ergebnis wurde mit einem NanoDrop-Spektralphotometer analysiert (siehe Abbildung 1).
Abbildung 2. Die Transkriptionsdemonstration von RNA unterschiedlicher Länge durch das T7-Kit jeweils im Elektrophoretogramm (Abbildung 2A), im Kapillarelektrophoresediagramm (Abbildung 2B) und im Chromatogramm (Abbildung 2C)
Abbildung 3. Synthese von gecappter RNA in vitro.
Die Reaktion wurde 2 Stunden lang bei 37 °C in einem PCR-Gerät inkubiert und anschließend mit Magnetkügelchen (Kat.-Nr. 12602) gereinigt. Die Ausbeute wurde mit einem NanoDrop-Spektralphotometer (siehe Abbildung 3A) bestimmt. Die Integrität wurde mittels Kapillarelektrophorese (siehe Abbildung 3B) analysiert.
10625_Manual_HB221111_DE.pdf
Zitate und Referenzen:
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