Beschreibung
Dies ist eine gentechnisch veränderte T7-RNA-Polymerase-Variante (low dsRNA), die aus der Wildtyp-T7-RNA-Polymerase abgeleitet und in Escherichia coli produziert wird. Sie reduziert die Produktion von doppelsträngiger RNA (dsRNA) erheblich und integriert gleichzeitig effizient Cap-Analoga. weist eine hocheffiziente In-vitro-Transkription (IVT) auf, die mit der Wildtyp-T7-RNA-Polymerase vergleichbar ist. Es katalysiert die 5'→3'-Synthese von RNA auf doppelsträngiger DNA aus seiner T7-Promotersequenz (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') und verwendet NTPs als Substrate.
Hinweis: G* ist die erste Base des RNA-Transkripts.
Besonderheit
- dsRNA-Level niedriger auf etwa 1/100000
- Kompatibel mit Trilink CleanCap AG
- Hohe Erträge vergleichbar mit WT
- Unterer Cap-Eingang
- Frei von tierischen Inhaltsstoffen (AOF)
Hier finden Sie Informationen zur Entwicklung dieses Enzyms.
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 10628ES10 | 10628ES60 | 10628ES72 | 10628ES86 |
|
|
| (10 KU) | (100 KU) | (250 KU) | (2.500 KU) |
| 10628 | CleaScrip™ T7 RNA-Polymerase (niedrige dsRNA, 250 U/μL) | 40 μl | 400 μl | 1 ml | 10 ml |
Technische Daten
| Quelle | Rekombinant Escherichia coli mit T7 RNA-Polymerase-Gen |
| Optimale Temperatur | 37℃ |
| Speicherpuffer | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) Glycerin, pH 7,9 bei 25℃ |
| Einheitendefinition | Die Enzymmenge, die zum Einbau von 1 nmol [3H] GMP in den säureunlöslichen Niederschlag innerhalb von 1 Stunde bei 37°C und pH 8,0 wird als 1 Einheit definiert. |
| Empfohlenes Mg2+ | 30 mM Magnesiumacetat |
Qualitätskontrolle Standard
| ICHtems | Spezifikation/Norm |
| Enzym Aktivität | 250-300 U/µl |
| Proteinreinheit | ≥95 % |
| Endotoxin | <20 EU/mg |
| Protease | Negativ |
| Exonuklease | Negativ |
| Spitzname | Negativ |
| RNase | Negativ |
| E.coli-Wirtsprotein | <50 ppm |
| E.coli-Host DNA | <10 fg/Einheiten |
| Mykoplasmenuntersuchung | Negativ |
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Zahlen
Abbildung 2. Bewertung der Immunogenität der IVT-Produkte bei muriner RAW264.7 Zellen (Abbildungen 2A und 2B). Die IFN-β-mRNA- und Proteinspiegel waren in RA reduziertW264.7 Zellen, die mit von Mutanten produzierter mRNA transfiziert wurden, verglichen mit dem Wildtyp. Dies deutet darauf hin, dass vom Wildtyp T7 RNAP synthetisierte mRNA die stärkste Immunreaktion hervorrief, während die mRNA der Mutanten eine deutlich geringere Reaktion zeigte.
Abbildung 3. Der dsRNA-Gehalt in mit CleaScript™ T7 RNA-Polymerase synthetisierter mRNA ist niedriger als in mit dem Wildtyp-Enzym synthetisierter mRNA nach Zellulosebehandlung.
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