Beschreibung
Es handelt sich um eine gentechnisch veränderte T7-RNA-Polymerase-Variante (low dsRNA), die von der Wildtyp-T7-RNA-Polymerase abgeleitet und in Escherichia coli produziert wird. Sie reduziert die Produktion doppelsträngiger RNA (dsRNA) deutlich und integriert gleichzeitig Cap-Analoga effizient. weist eine hocheffiziente In-vitro-Transkription (IVT) auf, die mit der Wildtyp-T7-RNA-Polymerase vergleichbar ist. Es katalysiert die 5'→3'-Synthese von RNA auf doppelsträngiger DNA aus seiner T7-Promotersequenz (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') und verwendet NTPs als Substrate.
Hinweis: G* ist die erste Base des RNA-Transkripts.
Besonderheit
- dsRNA-Level niedriger auf etwa 1/100000
- Kompatibel mit Trilink CleanCap AG, LZCap
- Hohe Erträge vergleichbar mit WT
- Unterer Cap-Eingang
- Frei von tierischen Inhaltsstoffen (AOF)
Hier finden Sie Informationen zur Entwicklung dieses Enzyms.
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 10629ES10 | 10629ES60 | 10629ES72 | 10629ES86 |
|
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| (10 KU) | (100 KU) | (250 KU) | (2.500 KU) |
| 10629 | CleaScrip™ T7 RNA-Polymerase (GMP-Grad, niedrige dsRNA, 250 U/μl) | 40 μL | 400 μl | 1 ml | 10 ml |
Technische Daten
| Quelle | Rekombinant E. coli mit T7-RNA-Polymerase-Gen |
| Optimale Temperatur | 37℃ |
| Speicherpuffer | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) Glycerin, pH 7,9 bei 25℃ |
| Einheitendefinition | Die Enzymmenge, die zum Einbau von 1 nmol [3H] GMP in den säureunlöslichen Niederschlag innerhalb von 1 Stunde bei 37°C und pH 8,0 wird als 1 Einheit definiert. |
| Empfohlenes Mg2+ | 30 mM Magnesiumacetat |
Qualitätskontrolle Standard
| ICHElemente | Spezifikation/Norm |
| Enzym Aktivität | 250-300 U/μL |
| Proteinreinheit | ≥95 % |
| Endotoxin | <20 EU/mg |
| Protease | Negativ |
| Exonuklease | Negativ |
| Spitzname | Negativ |
| RNase | Negativ |
| E. coli-Wirtsprotein | <50 ppm |
| E.coli-Host DNA | <10 fg/Einheiten |
| Mykoplasmenuntersuchung | Negativ |
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Tris-NTPs verringern synergistisch dsRNA
Zahlen
Abbildung 2. Bewertung der Immunogenität der IVT-Produkte bei muriner RAW264.7 Zellen (Abbildungen 2A und 2B). Die IFN-β-mRNA- und Proteinspiegel waren bei RA-Patienten reduziertW264.7 Zellen, die mit von Mutanten produzierter mRNA transfiziert wurden, verglichen mit dem Wildtyp. Dies deutet darauf hin, dass die vom Wildtyp T7 RNAP synthetisierte mRNA die stärkste Immunreaktion hervorrief, während die mRNA der Mutanten eine deutlich geringere Reaktion zeigte.
Abbildung 3. Der dsRNA-Gehalt in mit CleaScript™ T7 RNA-Polymerase synthetisierter mRNA ist niedriger als der in mit dem Wildtyp-Enzym synthetisierter mRNA nach Zellulosebehandlung.
Versand und Lagerung
Der Produkte werden mit Trockeneis versendet und können ein Jahr lang bei -15 °C bis -25 °C gelagert werden.
Veröffentlichung:
Entwickelte T7-RNA-Polymerase reduziert die dsRNA-Bildung durch Senkung der terminalen Transferase- und RNA-abhängigen RNA-Polymerase-Aktivitäten, The FEBS Journal, 3. März 2025
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