LZCap AU (3'Acm) ist ein Cap1-Analogon. Das Produkt wird für die Transkription mit der Anfangssequenz 5'AU3' verwendet, und die natürliche Cap1-Struktur wird durch Cap1-Transkriptions-Capping erzeugt. Im Vergleich zu Cap0, das durch traditionelle Capping-Methoden erzeugt wird, ermöglicht die durch CapAU (3'Acm) erzeugte Cap1-Struktur der SaRNA eine höhere Aktivität und Translationseffizienz in vivo.

US-Patent genehmigt.

Komponenten

Produktdetails

LZCap^® DNA-Vorlagendesign

LZCap^®AU(3'Acm) eignet sich für AG-initiierte Sequenzen. Wie in der folgenden Abbildung gezeigt, kann der T7-Promoter (unterstrichen), gefolgt von der AG-Sequenz, die Transkription effektiv initiieren.

Protokoll

1. Die für das Experiment benötigten Komponenten auf Eis auftauen.

2. Um das Transkriptionssystem bei Raumtemperatur zu konfigurieren, verwenden Sie das folgende Reaktionssystem.

Anstelle von Wildtyp-UTP kann modifiziertes N1-Me-pUTP verwendet werden. Das modifizierte N1-Me-pUTP verringert die Immunogenität von mRNA. Henovcom kann auch das modifizierte Nukleotid N1-Me-pUTP (Kat.-Nr.: HN1002) bereitstellen.

Hinweise:

1)     LZCap^®AU(3'Acm) eignet sich für den T7-Promotor-Transkriptionsvektor mit 5 'AU 3'-initiierten Sequenzen, was bei der Konstruktion des Vektors berücksichtigt werden muss.

2)     Die im Experiment verwendeten Reagenzien, Verbrauchsmaterialien und Behälter sind frei von RNase-Kontamination.

3)     Es wird empfohlen, für die Transkription eine linearisierte DNA-Vorlage zu verwenden.

4)     Bei Verwendung modifizierter Nukleotide anstelle von Wildtyp-Nukleotiden blieb die Endkonzentration der Reaktion unverändert.

5)     Wenn das PCR-Produkt als DNA-Vorlage für die Transkriptionsinitiierung verwendet wird, kann die Menge der DNA-Vorlage um die Hälfte reduziert werden.

3. Die vorbereitete Reaktionslösung mischen, kurz zentrifugieren und 2-3 Stunden bei 37°C inkubieren. Wenn die Transkriptlänge weniger als 100nt beträgt, erhöhen Sie die Reaktionszeit auf 4-8 Stunden.

Allgemeines Sicherheitsprofil

Lagerung

Dieses Produkt kann zwei Jahre lang bei -25–15 °C gelagert werden.

Vorsichtsmaßnahmen

1. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit beim Arbeiten mit diesem Produkt persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie Laborkittel und Einweghandschuhe.
2. Nur für Forschungszwecke.
   

Fragen und Antworten

1. Wie gestalten Sie das LZCap?

Enzyme haben eine relativ „spezifische“ Erkennung von Substraten. Wenn wir also eine neue Cap-Struktur entwerfen, benötigen wir einerseits neuartige Strukturmodifikationen für Patentzwecke, andererseits bemühen wir uns, die Ähnlichkeit mit natürlichen/bekannten Strukturen so weit wie möglich beizubehalten. Die natürliche Struktur hat ein Ribose-3'-OH, das modifiziert werden kann (z. B. Methylierung). Basierend auf dieser Überlegung haben wir uns entschieden, aus Patentgründen ein Kohlenstoffatom an der 3'-Position hinzuzufügen, gefolgt von einem NH, um die Wasserstoffbrückenbindung von OH nachzuahmen, und dann einer Acetylgruppe, um die Basizität von NH zu verringern und seine Wasserstoffbrückenbindungsfähigkeit zu verbessern. Die Aktivität von LzCap ist besser als Methylated natürliche Kappe, möglicherweise aufgrund erhöhter Wasserstoffbrücken. Im Vergleich zu den Methyl- und Methoxygruppen kann die Acetylaminogruppe auch die Van-der-Waals-Wechselwirkungen zwischen dem Substrat (Kappe) und dem Initiierungsfaktor (Enzym) erhöhen.

2. Ist die Acetylaminogruppe stabil?

Die Acetylaminogruppe ist bereits ausreichend stabil. Sie ist viel stabiler als die 7-Methylposition und die Phosphodiesterbindung, die die am wenigsten stabilen Teile der Kappe sind.

Bitte kontaktieren Sie uns für weitere Einzelheiten zur LZCap-Lizenzierung.