Beschreibung
LZCap GG (3'Acm) ist ein Cap1-Analogon. Das Produkt wird mit der Anfangssequenz von 5'GG3' zur Transkription verwendet und die natürliche Cap1-Struktur wird durch Cap1-Transkriptions-Capping erzeugt.
US-Patent genehmigt.
Komponenten
| Katzen-Nr. | Name | Größe |
| 10686 | LZCap GG (3'Acm) (50 mM) | 100 μL |
| 1 ml |
Produktdetails
| Summenformel | C35H48N16O25P4 (Freie Säure) |
| Molekulargewicht | 1216,19 (Freie Säure) |
| Konzentration | 50 ± 3 mM |
| Reinheit | HPLC ≥95 % |
LZCap DNA-Vorlage Indischgn
LZCap GG(3'Acm) Ist geeignet für GG-initiiert Sequenzen. Als gezeigt im Figur unten, die SP6 Promoter (unterstrichen) gefolgt durch die GG-Sequenz kann efeffektiv einleiten Transkription.
Protokoll
1. Komponenten auftauen erforderlich für das Experimentent auf Eis.
2. Hinzufügen RNase-freies Wasser und NTPs zu Reaktionsgefäß.
3. Hitze LZCap GG(3'Acm) Aliquot für 15 min bei 60°C. Abkühlen bei Raumtemperatur für 5 Mindest.
4. Sofort hinzufügen LZCap GG(3'Acm) ins Rohr geben und vortexen, um mischen. Drehen kurz zu sammeln flüssig.
5. Hinzufügen 10x Transkription Puffern und vortexen.
6. Hinzufügen DNA-Vorlage eineund SP6 Enzym Mischen.
7. Mischen Sie vorbereitet Reaktionslösung, Spin kurz und Inkubieren bei 37°C für 2-3 Std. Wenn das Transkript Länge Ist weniger als 100nt, erhöhen die Reaktionszeit auf 4-8 H.
| Komponente | Volumen (μl) | Endkonzentration |
| RNase Kostenloses Wasser | Bis zu 20 μl | / |
| ATP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| UTP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| CTP (100 mM) | 1 | 5 mm |
| GTP (100 mM) | 0,2 | 1 mM |
| LZCap GG(3'Acm) (50 mM) | 1.6 | 4 mm |
| 10×Transkription Puffer | 2 | 1 × |
| Linear DNA | 1 μg | 50 ng/µL |
| SP6 Enzym Mischen | 2 | / |
| Endgültiges Volumen | 20 μl | |
Hinweise:
1) Der SP6 Enzym mischen wir empfohlen Zu gebraucht Ist MEGAscript® Kit (AM1330).
2) LZCap GG(3'Acm) ist geeignet für den SP6-Promotor-Transkriptionsvektor mit 5 'GG 3'-initiierten Sequenzen, welche muss bei der Konstruktion des Vektors berücksichtigt werden.
3) Der Reagenzien, Verbrauchsmaterial Und Behälter gebraucht In Die Experiment Sind frei OF RNase Kontamination.
4) Es Ist empfohlen verwenden Sie eine linearisiert DNA-Temperaturzu spät zur Transkription.
5) Wann geändert Nukleotide waren gebraucht In Ort des Wildtyps Nukleotide, Die Finale Konzentrattion von Die Reaktion war unverändert.
6) Geändert N1-Me-pUTP dürfen Sei gebraucht In Ort des Wildtyps UTP. Die Modbestätigt N1-Me-pUTP reduziert die Immunogenität von mRNA. Henovcom dürfen Auch bieten geändert Nukleotid N1-Me-pUTP (Katze. NEIN.: HN1002).
7) Wenn das PCR proLeitung Ist gebraucht als die Transkription Einleitung DNA Vorlage, Die Menge von DNA Vorlage dürfen Sei reduziert von Hälfte.
Lagerung
Dieses Produkt kann zwei Jahre lang bei -25–15 °C gelagert werden.
Vorsichtsmaßnahmen
- Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit beim Arbeiten mit diesem Produkt persönliche Schutzausrüstung (PSA), wie Laborkittel und Einweghandschuhe.
- Nur für Forschungszwecke.
Fragen und Antworten
1. Wie gestalten Sie das LZCap?
Enzyme haben eine relativ „spezifische“ Erkennung von Substraten. Wenn wir also eine neue Cap-Struktur entwerfen, benötigen wir einerseits neuartige Strukturmodifikationen für Patentzwecke, andererseits bemühen wir uns, die Ähnlichkeit mit natürlichen/bekannten Strukturen so weit wie möglich beizubehalten. Die natürliche Struktur hat ein Ribose-3'-OH, das modifiziert werden kann (z. B. Methylierung). Basierend auf dieser Überlegung haben wir uns entschieden, aus Patentgründen ein Kohlenstoffatom an der 3'-Position hinzuzufügen, gefolgt von einem NH, um die Wasserstoffbrückenbindung von OH nachzuahmen, und dann einer Acetylgruppe, um die Basizität von NH zu verringern und seine Wasserstoffbrückenbindungsfähigkeit zu verbessern. Die Aktivität von LzCap ist besser als Methylated natürliche Kappe, möglicherweise aufgrund erhöhter Wasserstoffbrücken. Im Vergleich zu den Methyl- und Methoxygruppen kann die Acetylaminogruppe auch die Van-der-Waals-Wechselwirkungen zwischen dem Substrat (Kappe) und dem Initiierungsfaktor (Enzym) erhöhen.
2.Ist die Acetylaminogruppe stabil?
Die Acetylaminogruppe ist bereits ausreichend stabil. Sie ist viel stabiler als die 7-Methylposition und die Phosphodiesterbindung, die die am wenigsten stabilen Teile der Kappe sind.
Bitte kontaktieren Sie uns für weitere Einzelheiten zur LZCap-Lizenzierung.
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Anfrage
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FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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