Das Hieff Clone™ Universal II One Step Cloning Kit ist ein neu verbessertes Klonkit.

Der sorgfältig optimierte 2× Hieff Clone™ der 2. Generation Universal II Enzyme Premix kombiniert das rekombinante Enzym und den für die rekombinante Reaktion erforderlichen Puffer mit der Zugabe eines einzigartigen rekombinanten Verstärkers, um die Effizienz des rekombinanten Klonens deutlich zu verbessern.

Das Kit kann zum Klonen von PCR-Produkten an jede Stelle eines beliebigen Vektors verwendet werden und ist kompatibel mit nicht aufgereinigten PCR-Produkten, direkt wiederhergestellten PCR-Produkten und niedrigen Konzentrationen von wiederhergestellten Gummiprodukten. Dieses Produkt kann den homologen Arm-GC-Gehalt von 30–70 % des gemeinsamen Fragments wieder zusammensetzen. Der Vektor wurde vollständig linearisiert und homologe Sequenzen des Endes des linearisierten Vektors von 15–25 bp wurden in das 5‘-Ende der positiven und umgekehrten PCR-Primer des eingefügten Fragments eingeführt, sodass die 5‘- und 3‘-Enden der PCR-Produkte des eingefügten Fragments genau die gleiche Sequenz hatten, die den beiden Enden des linearisierten Vektors entsprach. Unter Einwirkung eines rekombinanten Enzyms kann die rekombinante Reaktion des PCR-Produkts und des linearisierten Vektors bei 50 °C in nur 5 Minuten abgeschlossen werden. Die positive Klonierungsrate kann über 95 % erreichen.

Merkmale

Einfach: Klonen Sie bis zu sechs DNA-Fragmente in einer einzigen Reaktion.

Flexibel: Designrichtlinien ermöglichen die Zusammenstellung in jeden Vektor Ihrer Wahl.

Effizient: Effizient für die Ligation von einem bis sieben Fragmenten.

Anwendungen

Schnell Klonen: Es ermöglicht die nahtlose Verknüpfung mehrerer überlappender DNA-Fragmente in einer einstufigen, 5–50-minütigen isothermen Reaktion.

Gerichtetes Klonen; Ortsgerichtete Mutagenese.

Technische Daten

Komponenten

Lagerung

Dieses Produkt sollte bei -25~-15℃ für 1 gelagert werden Jahre.

Zahlen

FAbbildung 1. 10 ng Low-Input-Einzelfragmente wurden im nicht-reanimationsrezeptiven Zustand des 6μL-Kleinsystems verbunden. Die Ergebnisse zeigten, dass 10923ES eine bessere Leistung als Konkurrenzprodukte aufwies, mit hoher Verbindungseffizienz, mehr Kolonien und einer positiven Rate von 100 %. AB: Klonplatte. Das Molverhältnis von Träger (10 kb) zu Insertionsfragment (1 kb) betrug 1:2. C: Elektrophoresekarte, identifiziert durch Insertionsfragment-PCR, M: YEASEN 10505ES.

Abbildung 2. Sechs Fragmente (mit einer Gesamtlänge von 7,6 kb) wurden in ein 11,6 kb großes Plasmid kloniert. Die Ergebnisse zeigten, dass 10923ES eine bessere Leistung als Konkurrenzprodukte aufwies, mit mehr Kolonien und einer Positivrate von 100 %. AB: Kolonieplatte. Das Molverhältnis von Träger (11,6 kb) zu Insertionsfragmenten betrug 1:2. C: Elektrophoreseanalyse des Insertionsfragments, M: YEASEN 10505ES. Plasmideingabe:200 ng/20 μL, 50 °C, 50 Min.

Verwandte Zitate und Referenzen:

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