Beschreibung
MicroRNAs sind eine Klasse nicht-kodierender RNAs mit einer Länge von etwa 22 nt, die eine wichtige Rolle bei der Regulierung der Genexpression in Pflanzen und Tieren spielen. Dieses Kit verwendet die Poly(A)-Tailing-Methode, um eine Reverse Transkription vom miRNA-Erststrang zu cDNA durchzuführen. Der 2×Hifair™ miRNA RT-Puffer im Produkt enthält alle Rohstoffe und Primer für die miRNA-Poly(A)-Tailing-Reaktion und die Reverse-Transkriptionsreaktion. Eine sorgfältige Optimierung stellt sicher, dass der Poly(A)-Modifizierungsprozess und der Reverse-Transkriptionsprozess gleichzeitig und effizient am miRNA-3'-Ende durchgeführt werden können.
Für optimale Versuchsergebnisse wird die Verwendung dieses Produkts in Verbindung mit dem Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Kat.-Nr. 11171) unseres Unternehmens empfohlen.
Merkmale
- Hohe Nachweisempfindlichkeit: 10 pg RNA können nachgewiesen werden
- Hohe Produktstabilität: bleibt bei 37℃ 7 Tage lang unverändert
Anwendung
- Erststrang-cDNA wird synthetisiert und kann als Vorlage fürr RT-PCR und Echtzeit-RT-qPCR.
Technische Daten
| Finale Produkt Typ | cDNA (Erststrang) |
| PCR-Methode | RT-PCR |
| Reaktionsformat | Isolierte Fraktion |
| Probentyp | miRNA |
| Optimale Reaktionstemperatur | 37℃ |
| Umkehren Transkriptase | MMLV |
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 11148ES50 (50 Zähne) |
| 11148-A | Hifair™ miRNA RT-Enzymmischung | 87,5 μl |
| 11148-B | 2×Hifair™ miRNA RT-Puffer | 250 μl |
| 11148-C | RNase-freies H2O | 10 ml |
| 11148-D | Universeller Reverse-Primer (10 μmol/L) | 4 ml |
| 11148-E | U6 Vorwärtsprimer (10 μmol/L) | 500 μl |
| 11148-F | U6 Reverse Primer (10 μmol/L) | 500 μl |
Lagerung
Das Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25 °C bis -15 °C gelagert werden.
Zahlen
Abbildung 1. Hohe Nachweisrate: Es konnten 10 pg RNA nachgewiesen werden.
Die synthetisierte hsa-miR-let-7e-5p (a) und die Gesamt-RNA der 293T-Zelle (b) wurden als Vorlagen verwendet und auf die folgenden Gradienten verdünnt: 60 Kopien bis 606 Kopien (6 Gradienten) und 10 pg-100 ng (5 Gradienten). Alle Gradienten-cDNAs wurden nachgewiesen.
[1] Huang G, Chen J, Liu J, Zhang X, Duan H, Fang Q. MiR-935/HIF1α-Rückkopplungsschleife hemmt die Proliferation und Invasivität von Gliomen. Onco Targets Ther. 2020;13:10817-10828. Veröffentlicht am 23. Oktober 2020. doi:10.2147/OTT.S244409(IF:4.147)
[2] Li H, Pan R, Lu Q, et al. MicroRNA-145-5p hemmt Osteosarkomzellen Proliferation durch gezielte Aktivierung des E2F-Transkriptionsfaktors 3. Int J Mol Med. 2020;45(5):1317-1326. doi:10.3892/ijmm.2020.4504(IF:4.101)
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