Beschreibung
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) ist ein schnelles Reverse-Transkriptions-Kit, das auf der Grundlage des Hifair™ entwickelt wurde. III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (ohne Farbstoff), geeignet für PCR-Amplifikation und RT-qPCR-Experimente. Im Vergleich zum Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (ohne Farbstoff) zeichnet sich durch stabile Nachweisraten, Spezifität und Ausbeutesicherheit aus, wobei die gesamte Reverse-Transkriptionszeit potenziell auf weniger als 6 Minuten reduziert werden kann, was die Versuchsdauer deutlich verkürzt.
Das Kit enthält gDNA Digester Mix, mit dem genomische DNA-Verunreinigungen in der RNA-Vorlage eliminiert werden können, wodurch zuverlässigere Folgeergebnisse gewährleistet werden. Das Kit enthält zwei Arten von cDNA-Syntheseprimern: Random Primer N6 und Oligo (dT)18. Benutzer können wählen zwischen Random Primern N6, Oligo (dT)18, oder genspezifische Primer als Primer für die Reverse-Transkription, je nach Bedarf. Das synthetisierte einzelsträngige cDNA-Produkt kann direkt für nachfolgende PCR- oder qPCR-Reaktionen verwendet werden.
Technische Daten
| Kat.-Nr. | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Größe | 10 T/100 T |
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ohne Farbstoff) | 50 μl | 500 μL |
| 11150-B | 5×gDNA-Verdauungsmischung | 20 μl | 200 μl |
| 11150-C | Zufällige Primer (50 μmol/L) | 20 μl | 200 μl |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L) | 20 μl | 200 μl |
| 11150-E | RNase-freies Wasser | 200 μl | 2×1 ml |
Lagerung
Dieses Produkt sollte bei -25~-15℃ gelagert werden für 1 Jahr.
Anweisungen
- Wenn das Experiment die Entfernung von Resten der genomischen DNA erfordert
1）gDNA-Verdauung
Bereiten Sie in einem RNase-freien Zentrifugenröhrchen die folgende Mischung vor und pipettieren Sie sie vorsichtig, um sie gut zu vermischen. Inkubieren Sie sie 2 Minuten lang bei 42 °C.
| Komponenten | Volumen (μL) |
| RNase-freies Wasser | Bis 10 μL |
| 5× gDNA-Verdauungsmischung | 2 μL |
| Gesamt-RNA* | 10 pg-5 μg |
| oder mRNA* | 10 pg-500 ng |
* Es wird empfohlen, dass die Eingangsmenge an Gesamt-RNA 2 μg nicht überschreitet. Wenn das Expressionsniveau des Zielgens niedrig ist, kann die Eingangsmenge auf maximal 5 μg Gesamt-RNA erhöht werden.
2）Vorbereitung des Reverse-Transkriptions-Reaktionssystems (20-μL-System)
| Komponenten | Volumen (μL) |
| die Reaktionslösung aus dem vorherigen Schritt | 10 μl |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ohne Farbstoff) | 5 μl |
| Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L)** | 2 μL |
| oder Random Primer (* für qPCR) (50 μmol/L)** | oder 2 μL |
| RNase-freies Wasser | Bis 20 μL |
* Die Anzahl der Primer kann entsprechend der Menge der eingegebenen Vorlage angepasst werden. Wenn das Reverse-Transkriptionsprodukt für qPCR-Experimente verwendet wird, können dem System Random Primer entsprechend der empfohlenen Menge hinzugefügt werden.
** Es wird empfohlen, zuerst 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (ohne Farbstoff) hinzuzufügen, gut zu mischen und dann den Reverse-Transkriptionsprimer hinzuzufügen, um sicherzustellen, dass der Primer nicht durch gDNA Digester beeinträchtigt wird.
3）Einstellungen für das Reverse-Transkriptionsverfahren
| Temperatur. | Zeit |
| 55℃* | 5 Minuten** |
| 85℃ | 5 Sek. |
* Bei Vorlagen mit hohem GC-Gehalt oder komplexen Vorlagen kann die Temperatur der Reverse-Transkription auf 60 °C erhöht werden.
** Dieses Produkt kann cDNA-Sequenzen unter 14 kb synthetisieren. Wenn Sie längere cDNA-Produkte benötigen, können Sie die Reverse-Transkriptionszeit entsprechend verlängern.
- Wenn das Experiment keine Entfernung genomischer DNA erfordert
1）Vorbereitung des Reverse-Transkriptions-Reaktionssystems (20-μL-System)
| Komponenten | Volumen (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (ohne Farbstoff) | 5 μl |
| Oligo d(T)18 Primer (50 μmol/L)** | 2 μL |
| oder Random Primer (* für qPCR) (50 μmol/L)** | oder 2 μL |
| Gesamt-RNA* | 10 pg -5 μg |
| oder mRNA | 10 pg - 500 ng |
| RNase-freies Wasser | Bis 20 μL |
* Es wird empfohlen, dass die Eingangsmenge an Gesamt-RNA 2 μg nicht überschreitet. Wenn das Expressionsniveau des Zielgens niedrig ist, kann die Eingangsmenge auf maximal 5 μg Gesamt-RNA erhöht werden.
** Die Menge der Primer kann entsprechend der Menge der eingegebenen Vorlage angepasst werden. Wenn das Reverse-Transkriptionsprodukt für qPCR-Experimente verwendet wird, können dem System Random Primer entsprechend der empfohlenen Menge hinzugefügt werden.
2）Einstellungen für das Reverse-Transkriptionsverfahren
| Temperatur. | Zeit |
| 55℃* | 5 Minuten** |
| 85℃ | 5 Sek. |
* Bei Vorlagen mit hohem GC-Gehalt oder komplexen Vorlagen kann die Temperatur der Reverse-Transkription auf 60 °C erhöht werden.
** Dieses Produkt kann cDNA-Sequenzen unter 14 kb synthetisieren. Wenn Sie längere cDNA-Produkte benötigen, können Sie die Reverse-Transkriptionszeit entsprechend verlängern.
Hinweise
- Alle Vorgänge sollten auf Eis und so durchgeführt werden, dass eine RNase-Kontamination vermieden wird.
- Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
- Bitte arbeiten Sie zu Ihrer Sicherheit mit Laborkitteln und Einweghandschuhen.
Unterlagen:
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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FAQ
Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von
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