MicroRNA, eine Klasse nicht-kodierender RNAs mit einer Länge von etwa 22 nt, ist weit verbreitet und spielt eine sehr wichtige Rolle bei der Regulierung der Genexpression in Pflanzen und Tieren. Dieses Kit verwendet die chimäre Fluoreszenzmethode SYBR Green I zur quantitativen Erkennung der miRNA-Fluoreszenz. Der 2×Hieff™ miRNA Universal qPCR Master Mix ist eine neue Generation von vorgemischten fluoreszierenden quantitativen PCR-Erkennungsreagenzien, die speziell für die quantitative Erkennung von miRNA entwickelt wurden. Er enthält speziellen ROX Passive Reference Dye. Geeignet für die meisten qPCR-Instrumente, die ROX-Konzentration auf verschiedenen Instrumenten muss nicht angepasst werden, es müssen nur Primer und Templates bei der Vorbereitung des Reaktionssystems hinzugefügt werden, um es zu amplifizieren. Die DNA-Polymerase verwendet chemisch modifizierte, hitzeaktivierte Polymerase, kombiniert mit einem speziellen Puffersystem, um die Reaktion spezifischer und empfindlicher zu machen und sie in einem größeren Bereich genau quantifizieren zu können.
Um optimale Versuchsergebnisse zu erzielen, wird die Verwendung dieses Produkts mit unserem Hifair™ miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Tailing) (Kat.-Nr. 11148) empfohlen.

Merkmale

• Plattformweit: Keine Änderung der ROX-Konzentration durch Verwendung vorgemischter Farben erforderlich
• Hohe Nachweisempfindlichkeit: 10 pg DNA können nachgewiesen werden
• Gute Verstärkungsleistung: Hervorragende Verstärkungseffizienz
• Hohe Spezifität: Kann einzelne Basenunterschiede zwischen miRNAs in der gleichen Familie erkennen

Anwendungen

• Genexpression

Technische Daten

Komponenten

Lagerung

Das Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25 °C bis -15 °C gelagert werden.

Zahlen

Abbildung 1. Gute Verstärkungsleistung: hervorragende Verstärkungseffizienz.

Die Gene miR-let-7b-5p, miR-let-7c-5p, miR-let-7e-5p und miR-let-7f-5p wurden unter Verwendung von menschlichen 293T-Zellen und Gesamt-RNA aus der Leber von Mäusen als Vorlagen amplifiziert.Die Ergebnisse zeigten, dass das Hifair™ miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Kat.-Nr. 11148ES) im Vergleich zu ähnlichen Produkten dem Reaktionssystem des Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Kat.-Nr. 11171ES) mit hervorragender Leistung entsprach.

Abbildung 2. Hohe Spezifität: Fähigkeit, einzelne Basenunterschiede zwischen miRNAs in derselben Familie zu erkennen.

Die menschliche hsa-let-7-Familie hat mehrere miRNAs, die sich in wenigen Basen oder sogar nur in einer einzigen Basis voneinander unterscheiden. Amplifizieren Sie diese miRNAs mit verschiedenen Primern und verwenden Sie Formel 2 – Δ CT x 100 % berechnete Übereinstimmungsrate. Die Ergebnisse zeigten, dass eng verwandte Mitglieder der Subtypfamilie effektiv unterschieden werden konnten.