Hifair^™ Das Advanced One Step RT-qPCR Kit ist ein Kit zur Fluoreszenzquantifizierung auf Basis des Farbstoffs SYBR Green I. Mithilfe genspezifischer Primer werden Reverse-Transkription und qPCR-Reaktionen in einem Röhrchen durchgeführt, wodurch wiederholtes Öffnen der Kappe und Pipettieren entfällt, was die Testeffizienz erheblich verbessert und das Kontaminationsrisiko verringert. Für RNA-Proben verwendet das Kit hitzebeständige Hifair^™ V Reverse Transkriptase für effiziente cDNA-Synthese und UNICON^™ HotStart Taq DNA-Polymerase zur quantitativen Amplifikation. Unter dem optimierten Puffersystem kann die Empfindlichkeit des Kits bei stark exprimierten Zielen bis zu 0,1 pg und bei mäßig exprimierten Zielen bis zu 1 pg betragen. Das Kit eignet sich auch zur Amplifikation und Quantifizierung von DNA-Proben. Es ermöglicht die empfindliche Erkennung und Quantifizierung von Nukleinsäuren aus verschiedenen Pflanzen- und Tierproben, Zellen und Mikroorganismen.

Technische Daten

Komponenten

Lagerung

Dieses Produkt sollte bei -25~-15℃ gelagert werden. weg aus Licht für 1 Jahr.

Anweisungen

1. Reaktion System Konfiguration*****

* Low Rox-Modelle und Modelle ohne Rox-Korrektur werden direkt nach dem obigen Reaktionssystem vorbereitet. Bei Verwendung des High Rox-Modells Hieff™ SP High Rox zu 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer bei 1:250 v/v hinzufügen, gut mischen und zentrifugieren. Die 2× Hifair^™ Advanced SG Buffer mit Hieff™ SP High Rox beeinträchtigt nicht die Verwendung der Korrekturmodelle Low Rox und No Rox.

** Die endgültige Primerkonzentration betrug 0,2 μmol/l und konnte je nach Bedarf auch zwischen 0,1 und 1 μmol/l angepasst werden.

*** Das Reagenz ist mit einer Gesamt-RNA im Bereich von 1 pg–1 μg äußerst empfindlich, und Tests menschlicher Proben ergaben eine optimale Eingabe von 1 pg–100 ng, wobei ein Gesamt-Ct-Wert entsprechend im Bereich von 15–30 kontrolliert wird.

**** Um die Gültigkeit und Reproduzierbarkeit der Zielgenamplifikation sicherzustellen, wird die Verwendung von 20 μl oder 50 μl empfohlen.

***** Bitte bereiten Sie die Proben in der Ultra-Clean-Bank vor und verwenden Sie Spitzen und Reaktionsgefäße ohne Nukleaserückstände. Spitzen mit Filterkartuschen werden empfohlen. Vermeiden Sie Kreuzkontamination und Aerosolkontamination.

2）Reaktionsprogramm

*Die Temperatur für die Reverse Transkription kann je nach experimentellem Bedarf zwischen 50 und 55 °C gewählt werden. Bei DNA-Proben kann der Reverse Transkriptionsprozess ausgelassen werden.

** In Sonderfällen kann die Annealing-/Extensionstemperatur entsprechend dem Tm-Wert des Primers angepasst werden, empfohlen werden 60 °C.

3) Anwendbares Modell

Instrumentenmodelle, die keine Rox-Kalibrierung erfordern:

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;

Anwendbare Low Rox-Modelle:

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 und 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Für High Rox geeignete Modelle*:

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

* Beachten Sie bei High Rox-Modellen, dass Hieff™ SP High Rox proportional zu 2 x Hifair hinzugefügt werden sollte^™ Vor Gebrauch Advanced SG Buffer.

Hinweise

1. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte arbeiten Sie zu Ihrer Sicherheit mit Laborkitteln und Einweghandschuhen.

Unterlagen:

Benutzerhandbücher