Hifair^™ Das Advanced One Step RT-qPCR Kit ist ein Kit zur Fluoreszenzquantifizierung auf Basis des Farbstoffs SYBR Green I. Mithilfe genspezifischer Primer werden Reverse-Transkriptase- und qPCR-Reaktionen in einem einzigen Röhrchen durchgeführt. Dadurch entfällt das wiederholte Öffnen und Pipettieren des Verschlusses, was die Testeffizienz deutlich verbessert und das Kontaminationsrisiko reduziert. Für RNA-Proben verwendet das Kit hitzebeständige Hifair^™ V Reverse Transkriptase für effiziente cDNA-Synthese und UNICON^™ HotStart Taq DNA-Polymerase für die quantitative Amplifikation. Dank des optimierten Puffersystems kann die Sensitivität des Kits bis zu 0,1 pg für stark exprimierte Ziele und bis zu 1 pg für moderat exprimierte Ziele betragen. Das Kit eignet sich auch zur Amplifikation und Quantifizierung von DNA-Proben. Es ermöglicht den sensitiven Nachweis und die Quantifizierung von Nukleinsäuren aus verschiedenen Pflanzen- und Tierproben, Zellen und Mikroorganismen.

Technische Daten

Komponenten

Lagerung

Dieses Produkt sollte bei -25 bis -15 °C gelagert werden. weg aus Licht für 1 Jahr.

Anweisungen

1. Reaktion System Konfiguration*****

* Low-Rox-Modelle und Modelle ohne Rox-Korrektur werden direkt nach dem obigen Reaktionssystem vorbereitet. Bei Verwendung des High-Rox-Modells Hieff™ SP High Rox zu 2 x Hifair™ Advanced SG Buffer im Verhältnis 1:250 v/v hinzufügen, gut mischen und zentrifugieren. Die 2 x Hifair^™ Advanced SG Buffer mit Hieff™ SP High Rox beeinträchtigt nicht die Verwendung der Korrekturmodelle Low Rox und No Rox.

** Die endgültige Primerkonzentration betrug 0,2 μmol/l und konnte je nach Bedarf auch zwischen 0,1 und 1 μmol/l angepasst werden.

*** Das Reagenz ist mit einer Gesamt-RNA im Bereich von 1 pg–1 μg äußerst empfindlich. Tests an menschlichen Proben ergaben eine optimale Zugabe von 1 pg–100 ng, wobei gegebenenfalls ein Gesamt-Ct-Wert im Bereich von 15–30 kontrolliert wurde.

**** Es wird empfohlen, 20 μl oder 50 μl zu verwenden, um die Gültigkeit und Reproduzierbarkeit der Zielgenamplifikation sicherzustellen.

***** Bitte bereiten Sie die Proben in der Ultra-Clean-Bank vor und verwenden Sie nukleaserückstandsfreie Spitzen und Reaktionsgefäße. Spitzen mit Filterkartuschen werden empfohlen. Vermeiden Sie Kreuzkontamination und Aerosolkontamination.

2) Reaktionsprogramm

*Die Temperatur für die reverse Transkription kann je nach experimentellem Bedarf zwischen 50 und 55 °C gewählt werden. Bei DNA-Proben kann die reverse Transkription entfallen.

** In Sonderfällen kann die Annealing-/Extensionstemperatur entsprechend dem Tm-Wert des Primers angepasst werden, empfohlen werden 60 °C.

3) Anwendbares Modell

Instrumentenmodelle, die keine Rox-Kalibrierung erfordern:

Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0, Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR;

Anwendbare Low Rox-Modelle:

ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 und 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Für High Rox geeignete Modelle*:

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

* Beachten Sie bei High Rox-Modellen, dass Hieff™ SP High Rox proportional zu 2 x Hifair hinzugefügt werden sollte^™ Advanced SG Buffer vor Gebrauch.

Hinweise

1. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt.
2. Bitte arbeiten Sie zu Ihrer Sicherheit mit Laborkitteln und Einweghandschuhen.

Unterlagen:

Sicherheitsdatenblatt

11175ES-A-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-B-MSDS-HB230927.PDF

11175ES-C-MSDS-HB230927.PDF

Benutzerhandbücher