Beschreibung
CRISPR/Cas9 ist eine Technik, bei der RNA-gesteuerte Cas-Nuklease spezifische DNA-Modifikationen an Zielgenen vornimmt. Dabei handelt es sich um einen erworbenen Immunabwehrmechanismus, den Bakterien und Archaebakterien als Reaktion auf Angriffe durch Phagen und fremde Plasmide entwickelt haben. In diesem System wird die Cas9-Nuklease mit künstlich optimierter einzelner Leit-RNA (sgRNA) gesteuert, um doppelsträngige DNA (dsDNA) an der Zielstelle zu schneiden, was zu DNA-Brüchen führt. DNA wird mit dem nicht-homologen Endverknüpfungs- oder Homologie-gesteuerten Reparaturmechanismus in vivo repariert, was zu Frameshift-Mutationen, zum Austausch oder zur Löschung von Genen führt.
Das HifairTM Precision sgRNA Synthesis Kit verwendet eine T7-RNA-Polymerase-Mischung, um spCas9 sgRNA effizient zu transkribieren. Das Kit enthält eine spezifische Sequenz, die vom Cas9-Protein erkannt wird und als Gerüst fungiert. Ein Teil der Sequenz kann teilweise mit der vom Benutzer entworfenen zielspezifischen Sequenz überlappen. Die komplementären Stränge werden durch DNA-Polymerase gefüllt, um dsDNA-Vorlagen für die Transkription zu erzeugen. Mit dem mitgelieferten Reagenz und den vom Benutzer entworfenen spezifischen DNA-Sequenzen kann das Kit 20-100 μg funktionale sgRNA innerhalb von 4 Stunden in einer einzigen Röhrchenreaktion.
Merkmale
Hohe Syntheseausbeute: In einer Einzelröhrchenreaktion über 4 Stunden kann die Ausbeute an sgRNA 20 - 100 μg erreichen.
Breites Anwendungsspektrum: Für verschiedene Arten von sgRNA können hohe Ausbeuten erzielt werden.
Hohe Reinheit: Die synthetisierte sgRNA hat ein einzelnes Band.
Hohe Aktivität: Die synthetisierte sgRNA kann Cas9 effektiv dazu anleiten, die Ziel-DNA zu spalten.
Anwendungen
Gen-Editierung mit CRISPR/Cas
Komponenten
| Komponenten Nr. | Name | 11355ES05 | 11355ES25 | 11355ES50 | 11355ES60 |
| 11355-A | 10×sgRNA-Enzymmischung | 10 μl | 50 μl | 100 μl | 200 μl |
| 11355-B | 10×sgRNA-Reaktionspuffer | 10 μl | 50 μl | 100 μl | 200 μl |
| 11355-C | 2×Canace Enzymmischung | 62,5 μl | 312.5 μl | 625 μl | 1,25 ml |
| 11355-D | Gerüstvorlage | 6,25 μl | 31,25 μl | 62,5 μl | 125 μl |
| 11355-E | NTPs (je 25 mM) | 40 μl | 200 μl | 400 μl | 800 μl |
| 11355-F | Kontroll-sgRNA-Oligon (10 μM) | 2 μL | 10 μl | 20 μl | 40 μl |
Versand und Lagerung
Dieses Produkt sollte bei -25 ~ -15 gelagert werdenOC für 2 Jahre.
Zahlen
Figur 1.Die Synthesemenge an sgRNA zu verschiedenen Zeitpunkten
Figur 2.Die Syntheseausbeute von sgRNA mit unterschiedlichen Sequenzen
Figur 3.Die Reinheit der synthetisierten sgRNA (bestimmt mit Agilent 2100)
Figur 4.Das Spaltungseffizienzdiagramm von sgRNA
Unterlagen:
Sicherheitsdatenblatt
11355_Sicherheitsdatenblatt_Ver.EN20250120.pdf
Benutzerhandbücher
11355_Manual_Ver.EN20240710.pdf
Zahlung und Sicherheit
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Anfrage
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